АННОТАЦИЯ
Изучены качественный состав и количественное содержание фенольных соединений сухого экстракта из листьев шалфея лекарственного, полученного из шрота после производства эфирного масла. Установлено, что экстракт содержит аминокислоты, полисахариды, гидроксикоричные кислоты, флавоноиды и обладает антимикробным и противовоспалительным действием.
Ключевые слова: шалфей лекарственный, экстракт, аминокислоты, полисахариды, фенольные соединения, антимикробная, противовоспалительная активность.
В современных условиях ограниченности природных ресурсов перспективным направлением развития фармацевтической науки является создание новых лекарственных препаратов путем комплексной переработки растительного сырья. Такой подход позволяет обеспечить расширение номенклатуры препаратов, рационально использовать природные ресурсы, повысить рентабельность производства и уменьшить негативное его влияние на окружающую среду. Перспективным объектом для изучения являются листья шалфея лекарственного, поскольку фармацевтической промышленностью используют, в основном терпены и дитерпены, тогда как растение содержит еще значительное количество фенольных соединений.
Ежегодно в Украине отходами производства эфирного масла шалфея становятся тонны шрота листьев и водного извлечения, которые содержат значительное количество БАВ. Поэтому целесообразно было получить из шрота и водного остатка сухой экстракт, исследовать его химический состав и фармакологическую активность.
Целью наших исследований было изучить химический состав сухого экстракта из листьев шалфея лекарственного, полученного путем комплексной переработки, и его фармакологическую активность.
Материалы и методы исследования.
Объектом нашего исследования был сухой экстракт из листьев шалфея лекарственного (Salviae folia), полученный путем комплексной переработки после получения эфирного масла.
Для получения сухого экстракта 1,0 кг листьев шалфея лекарственного заливали 30 л воды очищенной, проводили перегонку эфирного масла в течение 1 часа. Водное извлечение сливали, к шроту, оставшемуся после получения эфирного масла, приливали 3,0 л 50% спирта этилового и проводили экстракцию в течение суток. Экстракцию повторяли трижды. Полученные водные и спиртовые извлечения объединяли, упаривали при температуре 85-95 оС под вакуумом в вакуум- циркуляционном аппарате при 680-700 мм рт. ст. до объема водного остатка 2,0 л. Кубовый остаток - густая прозрачная темно-коричневая жидкость, которую оставляют для отстаивания на 4-5 суток в холодильнике. Полученный водный концентрат сушат в распылительной сушке с температурой теплоносителя 160 оС и на выходе - 80-90 оС до сухого экстракта.
Для установления качественного состава экстракта использовали общепринятые методы исследований: качественные реакции, бумажную (БХ) и тонкослойную хроматографии (ТСХ) [1, 2, 3].
Предварительное хроматографическое изучение качественного состава аминокислот в экстракте из листьев шалфея проводили методом восходящей бумажной хроматографии в системе растворителей н-бутанол-кислота уксусная-вода (4:1:2). Для сравнения использовали стандартный набор аминокислот (ТУ 6-09-3147-83) в концентрации 0,1%. Хроматограммы обрабатывали 0,2% раствором нингидрина в ацетоне и высушивали в сушильном шкафу при температуре 60-80 °С. Аминокислоты идентифицировали сравнивая значений Rf со стандартными образцами при параллельном хроматографии. Обнаружено не менее 5 аминокислот.
Идентификацию моносахаридов проводили с помощью бумажной хроматографии нисходящим способом в системе н-бутанол-кислота уксусная-вода (4:1:2) с достоверными образцами нейтральных моносахаридов. Хроматограммы проявляли раствором анилинфталата. В экстракте были идентифицированы глюкоза, галактоза и рамноза, а после гидролиза еще и арабиноза.
Гидроксикоричные кислоты и флавоноиды изучали методом двумерной БХ в сравнении с достоверными образцами гидроксикоричных кислот и флавоноидов в системах н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2) и 5% уксусная кислота с последующей обработкой хроматограмм парами аммиака.
Количественное определение БАР проводили спектрофотометрическим методом. Производные гидроксикоричных кислоты в пересчете на хлорогеновая кислоту определяли при длине волны 327 нм; флавоноиды в пересчете на рутин после образования комплекса с алюминием хлоридом - при 417 нм; полифенольные соединения в пересчете на галловую кислоту - при длине волны 270 нм. Оптическую плотность измеряли в кювете с толщиной слоя 10 мм на спектрофотометре Specol 1500 (Швейцария). Для статистической достоверности результатов определения проводили не менее 5 раз [1, 2, 3].
Изучение антибактериальной активности экстракта проводили методом диффузии в агар в Институте микробиологии и иммунологии им. И. И. Мечникова в лаборатории биохимии микроорганизмов и питательных сред под руководством к. биол. н. Осолодченко Т.П. [3, 4]. Согласно рекомендациям ВООЗ для оценки активности препаратов использовали референс-штаммы Staphylococcus aureus АТСС 25923, Staphylococcus aureus 6538 ATCC, Escherichia coli АТСС 25922, Proteus vulgaris NCTC 4636, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Pseudomonas aeruginosa 9027 ATCC, Basillus subtilis АТСС 6633, Candida albicans 885/653 ATCC. Для анализа использовали 1% водные растворы экстракта.
Противовоспалительную активность исследовали на белых мышах массой 17 г - 22 г на модели формалинового отека [4]. Препаратом сравнения был вольтарен. Степень противовоспалительной активности экстракта оценивали по антиэкссудативному эффекту. Активность исследуемых средств изучали по их способности уменьшать развитие отека по сравнению с контролем.
Результаты и обсуждение.
В результате предварительного химического и хроматографического исследования полученного экстракта установлено наличие таких групп БАР, как производные гидроксикоричные кислоты, флавоноиды и полифенольные соединения, аминокислоты и сахара. В сухом экстракте из листьев шалфея лекарственного выявлено: 3 гидроксикоричные кислоты - кофейную, розмариновое и неохлорогенова; 6 флавоноидов и их гликозидов - апигенин, лютеолин, кверцетин, 3- метоксилютеолин, лютеолин-7-О-глюкозид и кверцетин-3-О-арабинозид.
В результате изучения фенольного состава сухого экстракта из листьев шалфея лекарственного установили содержание гидроксикоричных кислот (18,50±0,03%), флавоноидов (4,67±0,04%) и полифенольных соединений (37,56±0,03%).
Экстракт из листьев шалфея лекарственного оказывает антибактериальное действие в отношении различных таксономических групп микроорганизмов (табл.).
Таблица - Исследование антибактериальной активности экстракта из листьев шалфея лекарственного методом диффузии в агар
|
Микроорганизмы |
Зона задержки роста микроорганизма, мм |
|
K aureus 25923 ATCC |
18+1 |
|
5. aureus 6538 ATCC |
21+1,5 |
|
E. coli 25922 ATCC |
15+0,5 |
|
P. vulgaris 4636 NCTC |
рост |
|
P. aeruginosa 27853 ATCC |
рост |
|
P. aeruginosa 9027 ATCC |
рост |
|
B. subtilis 6633 ATCC |
рост |
|
C. albicans 885/653 ATCC |
17+0,5 |
Полученные на модели формалинового отека у мышей результаты свидетельствуют о выраженной противовоспалительной активностью сухого экстракта из листьев шалфея лекарственного. Максимальный антиэкссудативный эффект экстракта 51,32% наблюдался в дозе 25 мг/кг.
Выводы Изучены качественный состав и количественное содержание фенольных соединений в сухом экстракте из листьев шалфея лекарственного, полученного путем комплексной переработки после выделения эфирного масла, исследована его антимикробная и противовоспалительная активность, что свидетельствует о перспективности использования его для создания новых лекарственных средств.
ЛИТЕРАТУРА
- Дослідження фенольних сполук листя евкаліпту / О. М. Кошовий, А. М. Комісаренко, А. М. Ковальова [та ін.] // Фармаком. - 2005. - № 2/3.- С. 151 - 161.
- Розробка метода стандартизаций нового лікарського засобу піфламін / А. М. Ковальова, Г. В. Георгіевський, В. М. Ковальов [та ін.] // Фармаком. - 2002. - №2. - С. 92-97.
- A new herbal remedy with anabolic activity on the basis of hydrophilic compounds of Eucalyptus leaves / Oleg M. Koshoviy, Victoria S. Kyslichenko, Victoria V. Velma, Andrej M. Komisarenko // Herba Polonica. - 2008. - Vol. 55. - № 1. - P. 72 - 77.
- Доклінічні дослідження лікарських засобів: Метод рекоменд. / За ред. чл.-кор. АМН Украіни О.В. Стефанова. - К.: Здоров’я, 2001. - С. 292 - 306.