Методом ВЭЖХ впервые исследован состав фенольных соединений жидкого экстракта травы белокудренника черного флоры Украины. Обнаружено 14 веществ, из них идентифицированы кислоты - розмариновая, p-кумаровая и хлорогеновая, а также апигенин. Методом спектрофотометрии определено содержание в жидком экстракте гидроксикоричных кислот, которое составило 3,38%; флавоноидов - 3,25%; танинов - 5,67%.
Ключевые слова: белокудренник черный, жидкий экстракт, ВЭЖХ, спектрофотометрия, фенилпропаноиды.
Белокудренник (Ballota L.) - род многолетних травянистых растений семейства Яснотковые (Lamiaceae). Включает в себя 33 вида, произрастающих преимущественно в Южной и ЮгоВосточной Европе и на Ближнем Востоке. Виды рода находят применение в фитотерапии и народной медицине, а также в декоративном садоводстве. Так, трава белокудренника черного (Ballota nigra L.) обладает седативным действием, применяется при депрессии, бессоннице. Основными биологически активными веществами данного растительного сырья являются фенолкаркарбоновые и гидроксикоричные кислоты, кумарины, флавоноиды, танины, компоненты эфирного масла [2, 3].
Ранее нами был изучен компонентный состав эфирного масла и ароматических кислот травы белокудренника черного [1, 4]. В продолжение фитохимического исследования из данного растительного сырья был получен жидкий экстракт и изучен состав его фенольных соединений.
Целью данной работы стало установление состава и определение количественного содержания фенольных соединений жидкого экстракта травы Ballota nigra L.
Материалы и методы
Жидкий экстракт получали методом последовательной дробной перколяции измельченной травы белокудренника черного 70% этанолом. Извлечения объединяли и упаривали до соотношения сырье : экстракт 1 : 1.
Для исследования фенольных соединений использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Экстракт фильтровали через мембранный тефлоновый фильтр с размерами пор 0,45 мкм в виалу для анализа. Идентификацию фенольных соединений производили по времени удерживания стандартов и спектральным характеристикам.
Анализ проводили на хроматографе фирмы Agilent Technologies (модель 1100), укомплектованном проточным вакуумным дегазатором G1379A, 4-х канальным насосом градиента низкого давления G13111A, автоматическим инжектором G1313A, термостатом колонок G13116A, диодноматричным детектором G1316A, хроматографической колонкой размером 2,1 х 150 мм, заполненной октадецилсилильным сорбентом ZORBAX-SB C-18 зернением 3,5 мкм.
Условия хроматографирования: скорость подачи подвижной фазы 0,25 мл/мин; рабочее давление элюента 240-300 кПа; температура термостата колонки 35 °С; объем пробы 2 мкл;
градиентный режим хроматографирования с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,1% водного раствора ортофосфорной кислоты и метанола c постепенным изменением концентрации последнего от 10 до 100%. Параметры детектирования: масштаб измерений 1,0; время сканирования 0,5 с; параметры снятия спектра - каждый пик 190-600 нм; длина волны 280, 313, 350, 371, 254 нм.
Количественное определение фенольных соединений проводили спектрофотометрическим методом в соответствии с методиками Европейской Фармакопеи и Государственной Фармакопеи Украины (ДФУ). Содержание суммы гидроксикоричных кислот определяли при 525 нм в пересчете на хлорогеновую кислоту, суммы флавоноидов - при 350 нм после образования комплекса с алюминия хлоридом в пересчете на комплекс апигенина с алюминия хлоридом, суммы танинов - при 760 нм в пересчете на пирогаллол.
Результаты и их обсуждение
В результате исследования в жидком экстракте травы белокудренника черного выявлены 14 фенольных соединений, 4 из которых идентифицированы (табл. 1).
Таблица 1 - Фенольные соединения жидкого экстракта травы белокудренника черного
|
Соединение |
Время удерживания, мин |
Содержание, мг/100г |
|
1 |
2 |
3 |
|
Не идентифицировано |
10,47 |
31 |
|
Не идентифицировано |
10,66 |
15 |
|
Не идентифицировано |
13,15 |
154 |
|
Не идентифицировано |
14,40 |
265 |
|
Не идентифицировано |
15,45 |
22 |
|
Не идентифицировано |
16,05 |
121 |
|
Не идентифицировано |
16,79 |
50 |
|
Не идентифицировано |
16,95 |
22 |
|
Не идентифицировано |
17,83 |
44 |
|
Хлорогеновая кислота |
19,06 |
890 |
|
Розмариновая кислота |
36,68 |
861 |
|
Апигенин |
38,34 |
77 |
|
Не идентифицировано |
39,33 |
12 |
|
p -Кумаровая кислота |
45,09 |
80 |
|
Всего |
2644 |
|
Таким образом, суммарное содержание выявленных в жидком экстракте травы Ballota nigra L. фенольных соединений составляет 2644 мг/100 г, доминирующими среди них являются хлорогеновая и розмариновая кислоты; из флавоноидных соединений идентифицирован апигенин.
Результаты количественного определения в исследуемом экстракте гидроксикоричных кислот, флавоноидов и танинов, проведенного методом спектрофотометрии, представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Содержание фенольных соединений в жидком экстракте из травы белокудренника черного
|
Содержание, % |
||
|
Гидроксикоричные кислоты |
Флавоноиды |
Танины |
|
3,38±0,09 |
3,25±0,10 |
5,67±0,26 |
Исходя из полученных данных, можно предположить наличие ряда фармакологических свойств жидкого экстракта травы Ballota nigra L., в частности, антиоксидантного, седативного и антигипоксического.
Выводы
- В результате исследования методом ВЭЖХ в жидком экстракте травы белокудренника черного выявлены 14 фенольных соединений, из которых идентифицированы розмариновая, p- кумаровая, хлорогеновая кислоты и апигенин.
- Доминирующими среди выявленных фенольных соединений являются хлорогеновая и розмариновая кислоты, содержание которых в жидком экстракте составило 890 и 861 мг/100 г соответственно.
- Методом спектрофотометрии определено содержание в жидком экстракте гидроксикоричных кислот, которое составило 3,38%; флавоноидов - 3,25%; танинов - 5,67%.
ЛИТЕРАТУРА
- Ковалева А. М., Колесник Я. С., Седова А. Б. Исследование ароматических кислот Ballota nigra / Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. Современные тенденции и перспективы развития фармацевтического образования и науки в России и за рубежом. Материалы научно-практической конференции с международным участием (21 - 23 ноября 2013 года). - 2013. - № 11.- С.76-78.
- Круглая А. А. Фенольные соединения травы белокудренника черного (Ballota nigra L.), произрастающего на Северном Кавказе / Научные ведомости Белгородского гос. ун-тета. - 2013. - Т. 21, № 4 (147). - С. 226-228.
- Яницкая А. В., Митрофанова И. Ю. Состав и содержание фенольных соединений в надэемной части белокудренника черного, произрастающего в Волгоградской области / Вестник Волгоградского гос. мед. ун-тета. - 2013. - № 4 (48). - С. 70-71.
- Kolisnyk, Y. S., A. M. Kovaleva, and O. V. Goryacha. The study of the volatile oils composition obtained from vegetative and generative organs of Ballota nigra L. - News of pharmacy, 2 (78). - 2014. - P. 59-62.