Методом ВЭЖХ исследован состав фенольных соединений сухого экстракта травы ясменника душистого. Идентифицированы и установлено количественное содержание хлорогеновой, o- кумаровой, п-кумаровой, 4,5-дикофеилхинной кислот, кверцетина, рутина, кемпферол-3-O- глюкозида, кемпферол-3-О-рутинозида. Доминирующими являются хлорогеновая кислота и рутин. Спектрофотометрическим методом определено содержание гидроксикоричных кислот - 7,57%, флавоноидов - 3,69%, танинов - 13,00% и суммы полифенолов - 67,00%.
Ключевые слова: ясменник душистый, сухой экстракт, ВЭЖХ, спектрофотометрия, фенилпропаноиды.
Виды семейства мареновые Rubiaceae Juss. широко используются в нетрадиционной медицине многих стран, чем мотивируют исследование биологически активных веществ (БАВ) учеными- фитохимиками.
Продолжая изучение представителей рода ясменник Asperula L., нами была разработана технология получения сухого экстракта из травы ясменника душистого Asperula odorata L. (Galium odoratum (L.) Scop.).
Ранее было установлено, что в траве ясменника душистого содержатся иридоиды группы асперулозида, эфирное масло, флавоноиды, в подземной части - антраценпроизводные группы ализарина [3].
Целью данной работы стало установление состава и определение содержания фенольних соединений в сухом экстракте травы ясменника душистого.
Материалы и методы
Сухой экстракт получали методом последовательной дробной перколяции сырья 70% этанолом. Извлечения объединяли и упаривали до 1/3 первоначального объема, затем обрабатывали хлороформом для удаления липофильных соединений. Очищенное извлечение упаривали под вакуумом до сухого остатка. Выход целевого продукта составил 7,6%.
Для исследования фенольных соединений использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [4]. Сухой экстракт растворяли в 90% метаноле и фильтровали через мембранный тефлоновый фильтр с размерами пор 0,45 мкм в виалу для анализа. Идентификацию фенольных соединений производили по времени удерживания стандартов и спектральным характеристикам.
Анализ проводили на хроматографе фирмы Agilent Technologies (модель 1100), укомплектованном проточным вакуумным дегазатором G1379A, 4-х канальным насосом градиентанизкого давления G13111A, автоматическим инжектором G1313A, термостатом колонок G13116A, диодноматричным детектором G1316A; хроматографическая колонка размером 2,1 х 150 мм, заполненная октадецилсилильным сорбентом, зернением 3,5 мкм, «ZORBAX-SB C-18».
Условия хроматографирования: скорость подачи подвижной фазы 0,25 мл/мин; рабочее давление элюента 240-300 кПа; температура термостата колонки 35 °С; объем пробы 2 мкл; в качестве подвижной фазы использовали смесь 0,1% раствора фосфорной кислоты с метанолом с увеличением концентрации последнего в смеси от 10% до 100%. Параметры детектирования: масштаб измерений 1,0; время сканирования 0,5 с; параметры снятия спектра - каждый пик 190-600 нм; длина волны, нм: 280, 313, 350, 371, 254.
Количественное определение гидроксикоричных кислот, флавоноидов, полифенолов и танинов проводили спектрофотометрическим методом. Содержание гидроксикоричных кислот определяли согласно методике Государственной фармакопеи Украины (ДФУ) при 525 нм в пересчете на хлорогеновую кислоту [1]. Содержание суммы флавоноидов определяли при 405 нм после образования комплекса с алюминия хлоридом в пересчете на комплекс рутина с алюминия хлоридом. Содержание суммы полифенолов и танинов проводили согласно методике ДФУ при 760 нм в пересчете на пирогаллол [2].
Результаты и их обсуждение
В результате исследования в сухом экстракте травы ясменника душистого выявлены 19 фенольных соединений, 8 из которых идентифицированы (рис.1, табл. 1).
Сухой экстракт содержит 7434,8 мг/100 г фенольных соединений, из них 5162,5 мг/100 г гидроксикоричных кислот и 1870,5 мг/100 г флавоноидов.
Среди гидроксикоричных кислот доминирующей является хлорогеновая - 2772,1 мг/100 г, среди флавоноидов выявлены производные кверцетина и кемпферола, превалирует рутин - 792,2 мг/100 г.
При определении содержания флавоноидов методом диференциальной спектрофотометрии установлено, что максимум поглощения сухого экстракта находится при /.=405 нм, что соответствует максимуму поглощения рутина. Таким образом, дифференциальный спектр поглощения экстракта вполне соотносятся с данными, полученными при его ВЭЖХ анализе.
Результаты определения содержания гидроксикоричных кислот, флавоноидов, полифенолов и танинов представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Содержание фенольных соединений в сухом экстракте из травы ясменника душистого
|
Содержание, % |
|||
|
Гидроксикоричные кислоты |
Флавоноиды |
Полифенолы |
Танины |
|
7,57±0,10 |
3,69±0,11 |
67,00±1,60 |
13,00±0,35 |
Выявленные соединения создают предпосылки для изучения антиоксидантного, гепатопротекторного и иммуномодулирующего действия сухого экстракта травы ясменника душистого.
Выводы
- В сухом экстракте из травы ясменника душистого методом ВЭЖХ выявлено 19 фенольных соединений, из которых и установлено количественное содержание хлорогеновой, о -кумаровой, п - кумаровой, 4,5-дикофеилхинной кислот, кверцетина, рутина, кемпферол-3-О-глюкозида, кемпферол- 3 -O-рутинозида.
- Доминирующими являются хлорогеновая кислота и рутин.
- Спектрофотометрическим методом определено содержание гидроксикоричных кислот - 7,57%, флавоноидов - 3,69%, танинов - 13,00% и суммы полифенолов - 67,00%.
ЛИТЕРАТУРА
- Державна фармакопея Украіни / Держ. п-во — Украінський науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів ”. - 1-е вид., 3 допов. - Х. : Держ. п-во «Украінський науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів», 2009. - 280 с.
- Державна фармакопея Украіни / Держ. п-во “Науково-експертний фармакопейний центр”. - 1-е вид., 2 допов. - Х. : Держ. п-во «Науково-експертний фармакопейний центр», 2008. - 620 с.
- Изучение липофильных соединений травы Asperula odorata L. и их биологической активности / Т.В. Ильина, А.М. Ковалева, Н.С. Юрченко, Н.В. Кашпур, А.Ю. Волянский // Актуальные проблемы науки фармацевтических и медицинских вузов: от разработки до коммерциализации: Материалы научно-практ. конф. с междунар. участием, посв. 75-летию ПГФА (7-9 декабря 2011 года), г. Пермь - 2011. - С.85-87.
- HPLC Profiles of Standard Phenolic Compounds Present in Medicinal Plants / G. Mradu, S. Saumyakanti, M. Sohini, M. Arup // Int. J. of Pharmacognosy and Phytochemical Research. - 2012. - 4(3). - Р.162-167.