АННОТАЦИЯ
Из сбора желудочного и сбора желудочного №3 гравиметрическим методом были получены полисахаридные комплексы и изучен их качественный состав. Изучение качественного состава моносахаридов проводили методом бумажной хроматографии после предварительного кислотного гидролиза в течение 5 часов. В результате было установлено наличие глюкозы, галактозы, арабинозы и рамнозы. Также было проведено изучение фракционного состава полисахаридов. Нами были выделены фракции водорастворимых полисахаридов (ВРПС), пектиновых веществ (ПВ), гемицеллюлозы А (ГЦ А) и гемицеллюлозы Б (ГЦ Б) и определено их количественное содержание.
Ключевые слова: желудочный сбор, полисахариды, гравиметрия, моносахаридный состав.
Заболевания органов пищеварения, вследствие большой распространенности, сложности патогенеза, недостаточной эффективности существующих методов лечения и склонности к затяжному рецидивирующему течению, является важным разделом изучения клинической медицины. Достижения последних лет в области гастроэнтерологии, изыскание, целенаправленный синтез и изучение новых эффективных лекарственных средств свидетельствует о том, что проблема лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) является актуальной.
Особое место в комплексной терапии заболеваний ЖКТ принадлежит лекарственным растениям (ЛР) и сборам на их основе. Это связано с тем, что фитотерапия хорошо переносится пациентами, практически не давая нежелательных эффектов. Сборы ЛР можно использовать одновременно с другими методами лечения, которыми располагает современная медицина, что позволяет гораздо эффективнее и быстрее добиться выздоровления. В тяжелых случаях добавление фитотерапии к фармакотерапии повышает не только эффективность, но и безопасность лечения, так как они обладают мембраностабилизирующим эффектом и с током жидкости быстрее выводят метаболиты, токсины и продукты клеточного распада из организма. В ряде случаев, когда отсутствуют признаки острого воспаления, фитотерапия может быть основным видом терапии, она незаменима в восстановительном периоде и используется для профилактики рецидивов заболеваний ЖКТ при их хроническом течении.
Первый эффект, который оказывают полисахариды после приема, связан с изменением вязкости содержимого желудка и кишечника. На поверхности слизистой желудка и кишечника высокомолекулярные полисахариды формируют гель и благодаря этому оказывают обволакивающее и защитное действие, предохраняя слизистые оболочки от раздражающего влияния агрессивных факторов. За счет стимуляции пролиферации эпителиальных клеток продукты ферментации полисахаридов обеспечивают заживление поврежденной слизистой желудка и кишечника [5].
Большой интерес представляют данные об антимикробной активности различных фракций полисахаридных комплексов. Установлено, что пектиновые вещества оказывают бактерицидное действие на грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы. Кроме этого, важным свойством некоторых полисахаридов является их способность связывать и выводить из организма человека тяжелые металлы, в том числе радионуклиды [6].
Цель
Целью работы было получение полисахаридных комплексов и изучение их качественного моносахаридного состава, а также изучение фракционного состава полисахаридов и определение их количественного содержания.
Материалы и методы
В качестве объектов исследований нами были выбраны желудочный сбор, включающий ромашки цветки, тысячелистника трава, календулы цветки, зверобоя трава, мяты перечной листья, и желудочный сбор №3, в состав которого входят крушины кора, крапивы листья, мяты перечной листья, валерианы корневища с корнями, аира корневища.
Количественное содержание суммы водорастворимых полисахаридов определяли гравиметрическим методом по нижеприведенной методике.
20 г измельченного сбора помещали в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, заливали 200 мл воды, колбу соединяли с обратными холодильниками и кипятили при перемешивании в течение 30 мин. Экстракцию проводили дважды, используя первый раз 200 мл, второй раз 100 мл воды. Водные извлечения объединяли, центрифугировали и декантировали в мерную колбу вместимостью 500 мл через 5 слоев марли, вложенной в стеклянную воронку диаметром 55 мм и предварительно промытую водой. Фильтр промывали водой и доводили объем раствора водой до метки (раствор А).
25 мл раствора А переносили в центрифужную пробирку, добавляли 75 мл 95% этанола, перемешивали, подогревали на водяной бане до 30°С в течение 5 мин. Через 1 ч содержимое пробирки центрифугировали с частотой вращения 5000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость отфильтровывали под вакуумом при остаточном давлении 13-16 кПа через высушенный до постоянной массы при температуре 100-105°С стеклянный фильтр ПОР-16 диаметром 40 мм. Осадок количественно переносили на фильтр, последовательно промывали 15 мл раствора 95% этанола в
Изучение моносахаридного состава полученных полисахаридных комплексов проводили методом бумажной хроматографии. Для этого по 0,1 г полисахаридных комплексом растворяли в минимальном объеме воды (1,5-2 мл) и гидролизовали таким же объемом 20% раствора кислоты серной при нагревании на водяной бане, контролируя ход гидролиза хроматографически. Полный гидролиз проходил за 5 час. Гидролизаты нейтрализовали бария карбонатом до нейтральной реакции по универсальному индикатору. Растворы отфильтровывали, промывали фильтры и осадки водой. Фильтраты упаривали под вакуумом досуха и растворяли в 0,5 мл этанола. Полученные растворы наносили на хроматографическую бумагу «Filtrak F» №7 и хроматографировали в системе растворителей ацетон-н-бутанол-вода (7:2:1) нисходящим способом в присутствии достоверных образцов моносахаридов. Хроматограммы высушивали на воздухе, обрабатывали анилинфталатным реактивом и нагревали в сушильном шкафу в течение 10 мин при 100°С. Сахара проявлялись в виде коричневых (гексозы) и розовых (пентозы) пятен [3,4].
Из шрота, оставшегося после получения липофильных фракций, последовательно выделяли фракции полисахаридов: водорастворимые (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ) и гемицеллюлозы А (ГЦ А) и Б (ГЦ Б). Изучение фракционного состава полисахаридов проводили по следующей методике.
100 г воздушно сухого шрота экстрагировали 2 л горячей воды при нагревании до 95°С в течение 1 ч при постоянном перемешивании. Повторное извлечение проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Полученные извлечения объединяли и упаривали до 1/5 первоначального объема. Полисахариды осаждали трехкратным объемом 96% этанола при комнатной температуре. Выпавшие осадки отфильтровывали, последовательно промывали 96% этанолом, ацетоном, эфиром, высушивали и взвешивали. Получали фракцию ВРПС.
Из шрота, оставшегося после получения ВРПС, выделяли ПВ. Экстракцию сырья проводили дважды смесью 0,5% растворов кислоты щавелевой и аммония оксалата (1:1) в соотношении сырье- экстрагент 1:20 при температуре 80-85°С в течение 2 ч. Полученные извлечения объединяли, концентрировали и высаждали пятикратным объемом 96% этанола. Полученные осадки отфильтровывали, промывали этанолом, высушивали и взвешивали. Получали фракции ПВ.
Из шрота, оставшегося после получения ВРПС и ПВ, выделяли ГЦ. Экстракцию проводили дважды 7% раствором натрия гидроксида в соотношении сырье-экстрагент 1:5 при комнатной температуре в течение 12 ч. Щелочные извлечения объединяли и подкисляли кислотой уксусной ледяной до выпадения осадка гемицеллюлозы А. Осадок отфильтровывали, промывали 96% этанолом, высушивали и взвешивали. К полученному фильтрату добавляли двукратный объем 96% этанола. Образовавшийся осадок отфильтровывали, промывали 96% этанолом, высушивали и взвешивали. Получали фракции ГЦ Б [2]. Результаты определения количественного содержания фракций полисахаридов представлены в таблице.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований было установлено, что количественное содержание суммы водорастворимых полисахаридов в желудочном сборе составило 10,75±0,23%, а в желудочном сборе №3 - 12,47±0,35%.
Результаты хроматографического изучения моносахаридного состава полисахаридных комплексов из желудочного сбора и желудочного сбора №3 представлены на рисунке.
В результате хроматографического изучения в гидролизате полисахаридных комплексов из желудочного сбора и желудочного сбора №3 были обнаружены глюкоза, галактоза, арабиноза и рамноза.
Результаты изучения фракционного состава полисахаридов желудочного сбора и желудочного сбора №3 представлены в таблице.
Таблица - Результаты определения содержания фракционного состава полисахаридов в желудочном сборе и желудочном сборе №3
|
Объект исследования |
Количественное содержание, % |
|||
|
ВРПС |
ПВ |
ГЦ А |
ГЦ Б |
|
|
Желудочный сбор |
4,03±0,19 |
4,78±0,15 |
11,23±0,25 |
7,33±0,20 |
|
Желудочный сбор №3 |
5,16±0,14 |
5,86±0,19 |
13,50±0,23 |
9,64±0,21 |
Как видно из таблицы, содержание всех фракций полисахаридов выше в желудочном сборе №3. Так, содержание ВРПС составляет 5,16%, ПВ - 5,86%, ГЦ А - 13,50%, гемицеллюлозы Б - 9,64%.
Выводы
- Гравиметрическим методом было определено содержание суммы водорастворимых полисахаридов в желудочном сборе и желудочном сборе №3, которое составило 10,75±0,23% и 12,47±0,35% соответственно.
- Методом бумажной хроматографии в системе растворителей ацетон-н-бутанол-вода (7:2:1) нисходящим способом после предварительного кислотного гидролиза был изучен моносахаридный состав полученных полисахаридных комплексов из желудочного сбора и желудочного сбора №3. В результате в гидролизатах были обнаружены глюкоза, галактоза, арабиноза и рамноза.
- В желудочном сборе и желудочном сборе №3 был изучен фракционный состав полисахаридов. Было определено содержание фракций ВРПС, ПВ, ГЦ А и ГЦ Б.
- Полученные результаты будут использованы при разработке соответствующих разделов методик контроля качества на исследуемые сборы.
ЛИТЕРАТУРА
- Державна Фармакопея Украіни / Держ. п-во "Науково-експертний фармакопейний центр”. - 1-е вид., 3 допов. - Х. : Держ. п-во “Укрвінський науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів”, 2009. - 280 с.
- Кацуба І.К. Дослідження полісахаридів мати-й-мачухи / І.К. Кацуба, О.М. Новосел, В.С. Кисличенко // Украінський медичний альманах. - 2013. - Т. 16, №4. - С. 25-27.
- Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам анализа : в 2-х ч. / Под ред. О. Микеша. - М. : Мир, 1982. - 781 с.
- Пузак О. А. Вивчення якісного складу полісахаридних комплексів з листя абрикосу звичайного / О. А. Пузак, Л. В. Упир, В. С. Кисличенко // Сьогодення та майбутне фармаціі : тез. доп. Всеукр. конгр., м. Харків, 16-19 квіт. 2008 р. - Х., 2008. - С. 171.
- Хотимченко Ю.С. Фармакология некрахмальных полисахаридов / Хотимченко Ю.С., Ермак И.М., Бедняк А.Е. и др. // Вестник ДВО РАН. - 2005. - № 1. - С. 72-82.
- Хотимченко Ю.С. Фармакологические свойства пектинов / Ю.С. Хотимченко, А.В. Кропотов, М.Ю. Хотимченко // Эфферентная терапия. - 2001. - Т. 7, № 4. - С. 22-36.