Применение хроматографических методов анализа в разработке фармакопейных стандартных образцов

АННОТАЦИЯ

Цель работы: разработка фармакопейного стандартного образца оригинального препарата - дипептидного атипичного нейролептика - дилепт. Объектами исследования являлись две опытные серии субстанции препарата. Методами анализа были выбраны: тонкослойная хроматография (ТСХ) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).. Исследование проводились на базе ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России. Выводы. Хроматографические методы пригодны для контроля качества ФСО. Наиболее чувствительным, селективным и информативным методом является ВЭЖХ. Проведенные исследования позволили выбрать одну опытную партию дилепта для разработки ФСО, которая стандартизована по показателю "посторонние примеси".

Ключевые слова: фармакопейные стандартные образцы, стандартизация, ВЭЖХ, посторонние примеси.

В настоящее время широкое развитие и использование получили физико-химические методы анализа лекарственных средств, такие как ИК, УФ-спектрофотометрия, атомноадсорбционная спектрометрия (ААС), газожидкостная хроматография (ГЖХ), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). При изучении ведущих Фармакопей, а так же зарубежной нормативной документации, можно сделать выводы о преимущественном использование именно физических, и физико-химических методов анализа в контроле качества ЛС. При проведении исследований вышеуказанными методами используются стандартные образцы лекарственных препаратов, позволяющие провести сравнение характеристик образца, поступившего на анализ, и стандарта, имеющего точно описанные свойства.

Основной задачей фармацевтической отрасли на настоящий момент является создание фармакопейных стандартных образцов. Разработка и производство любого стандартного образца, является дорогостоящим и крайне затруднительным процессом, который требует проведения этапов очистки, стандартизации с использованием чувствительных, специфических и достоверных современных методов анализа.

Цель работы: разработка фармакопейного стандартного образца оригинального препарата - дипептидного атипичного нейролептика - дилепт. Объектами исследования являлись две опытные серии субстанции препарата.

Материалы и методы: методами анализы были выбраны тонкослойная хроматография (ТСХ) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

В соответствие с требованием фармакопейной статьи на субстанцию дилепта посторонние примеси определяли методом ТСХ. В качестве сорбента использовался силикагель, нанесенный на пластинку для хроматографии "Kieselgel" Merck 15х15. Для получения четких пятен на хроматограмме большую роль играет растворитель, который должен отвечать нескольким требованиям, а именно, растворитель должен быть как можно менее полярным, а так же летучим, что бы быстро удаляться с поверхности пластины. Так для дилепта и его примеси была использована смесь равных объемов хлороформ/метанол. Для приготовления растворов: субстанцию дилепта, его рабочий стандартный образец и рабочий стандартный образец примеси растворяли в смеси растворителей в концентрации 1 мг/мл. Для детектирования веществ на хроматограмме использовали камеру с парами йода. Выбор подвижной фазы, является наиболее важным этапом в проведении тонкослойной хроматографии, было опробовано несколько смесей, но наилучший результат показала система хлороформ:метанол:аммиак(25%) (100:24:3).

Подготовка пластины заключалась в следующем: пластину помещали в камеру со смесью растворителей, отмечая линию старта и финиша, когда фронт растворителей проходил до линии финиша, пластину выдерживали еще 30 минут, затем вынимали и сушили на воздухе в течение часа. Подготовка пластины подобным образом позволяет избавиться от полимерных соединений неподвижной фазы, которые мешают проведению данного метода анализа. На линию старта наносили 3 точки по 10 мкл: 1- раствор дилепта, 2 - раствор рабочего стандарта дилепта, 3 - раствор рабочего стандарта Н-капроил-Т-пролила. Пластину с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 5 минут, а затем помещали в камеру в смесь растворителей, и

хроматографировали восходящим способом. Когда фронт растворителей проходил 12 см, пластину вынимали из камеры, сушили и помещали в камеру с парами йода. На рис. 1

представлена хроматограмма исследуемой серии субстанции дилепта и рабочих стандартных образцов.

1 - дилепт. 2 - рабочий стандартный образец дилепта. 3 - рабочий стандартный образец N- капроил-Т-пролила

Рисунок 1 - Хроматограмма исследуемой серии субстанции дилепта

В ходе нашего исследования в анализируемых образцах известной примеси (полупродукта синтеза) не обнаружено. В общих рекомендациях по разработке фармакопейных стандартных образцов, а так же в рекомендациях ВОЗ предлагаются различные методы анализа - в частности высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

Исследование проводилось на хроматографе фирмы Agilent Technologies 1200. В качестве подвижной фазы была выбрана система ацетонитрил : вода очищенная : ледяная уксусная кислота (500:500:1), колонка Luna C18 250x4,6 мм 5 мкм, объем вводимой пробы 20 мкл (раствор дилепта в подвижной фазе), скорость потока подвижной фазы - 0,5 мл/мин, длина волны детектирования - 205 нм, температура колонки комнатная. На рис. 2 представлена хроматограмма модельной смеси дилепта и возможной примеси (полупродукт синтеза). На хроматограмме присутствуют неидентифицированные примеси в следовых количествах, на основании чего мы можем сделать вывод о большей информативности и специфичности метода высокоэффективной хроматографии (ВЭЖХ) в сравнении с методом тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Так как требования к фармакопейным стандартным образцам превосходят требования к субстанциям лекарственных препаратов предметом наших дальнейших исследований будет являться разработка и внедрение методик очистки данной субстанции от неизвестных примесей, ее стандартизация и подготовка нормативной документации на полученный фармакопейный стандартный образец.

Выводы: Хроматографические методы пригодны для контроля качества ФСО и наиболее чувствительным, селективным и информативным методом является ВЭЖХ. Проведенные исследования позволили выбрать одну опытную партию дилепта для разработки ФСО, которая стандартизована по показателю "посторонние примеси".

  1. Н-капроил-һ-пролил (0,1 мг). 2. Дилепт (10 мг)

Рисунок 2 - Хроматограмма модельной смеси дилепта и возможной примеси

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Гусев А.В., Грушевская Л.Н., Степаненко О.Б.. Авдюнина Н.И., Пятин Б.М. Разработка методик анализа субстанции ноопепта для создания государственного стандартного образца (ГСО) // Химико-Фармацевтический журнал. - 2007. - Т.41. - №12. - С.44-47.
  2. Гусев М.В. Изучение и стандартизация нового лекарственного препарата пептидной структуры - дилепт. Дис. канд. фарм. наук. - М.: НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, 2009.
  3. Орлов Ф.С. Анализ и стандартизация лекарственной формы с модифицированным высвобождением нового оригинального отечественного препарата дилепт. . Дис. канд. фарм. наук. - М.: ПМГМУ им. И.М.Сеченова, 2012.- 125 с.
  4. Щепочкина О.Ю., Орлов Ф.С., Грушевская Л.Н., Пятин Б.М. Разработка ВЭЖХ методики определения посторонних примесей в таблетках дилепта пролонгированного действия. - Биофармацевтический журнал, 2012.-Т4., №1. - С. 29-34.
  5. Федеральный закон Российской Федерации от 12 апреля 2010 г. N 61-ФЗ "Об обращении лекарственных средств"
Год: 2014
Город: Шымкент
Категория: Медицина