АННОТАЦИЯ
В статье приведены данные по валидации методики определения сопутствующих примесей в капсулах метронидазола методом тонкослойной хроматографии. Валидация осуществлена в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Украины
(Европейской фармккопеи). Изучены валидационные характеристики - специфичность, диапазон применения, пригодность хроматографической системы, предел обнаружения. Проведенные исследования подтвердили приемлемость предложенной методики для контроля качества капсул метронидазола.
Ключевые слова: амизон, сопутствующие примеси, валидация аналитических методик.
Цель исследований
На современном этапе при подготовке лекарственного препарата к промышленному выпуску и регистрации обязательным требованием является валидация аналитических методик, позволяющих надежно подтверждать качество готового продукта при промышленном выпуске. В настоящее время в связи с внесением изменений в технологию синтеза субстанции противовирусного действия «Амизон» необходимо внести изменения в модуль «Качество» регистрационного досье капсул «Амизон», связанные с сопутствующими примесями. Для этого необходимо провести валидацию методики определения сопутствующих примесей методом тонкослойной хроматографии.
Материалы и методы
Валидацию проводили в соответствии с требованиями общей статьи —Валидация аналитических методик и испытаний”[1].
1. В данной работе был использован стандартный субстанции амизона (ОАО
«Фармак», с.АМ109-11, P = 99,76 %, W = 0,03 %) и образец опытно-промышленной серии препарата «Амизон, капсулы 0,5 г» (ОАО «Фармак», с.10911).
Приготовление промежуточного раствора. 50,0 мг СО субстанции амизона растворяют в 96 % спирте Р и доводят объем раствора тем же растворителем до 10,0 мл.
Таблица 1 - Приготовление модельных растворов.
|
Модельный раствор |
М1 |
М2 |
М3 |
М4 |
М5 |
|
Концентрация амизона в модельном растворе по отношению к предельно допустимой концентрации примеси N, % (относ.) |
0,2 |
0,4 |
0,6 |
0,8 |
1,0 |
|
Аликвота промежуточного раствора, мл |
0,2 |
0,4 |
0,6 |
0,8 |
1,0 |
Приготовление модельных растворов. Модельные растворы сравнения (М1 - М5) готовят объемным методом из промежуточного раствора в мерных колбах вместимостью 100,0 мл, используя в качестве растворителя 96 % спирт Р (Таблица 1).
Приготовление растворов сравнения (а) и (с). Раствор сравнения (а) и раствор сравнения (с) готовят согласно методике.
Приготовление испытуемых растворов.. Испытуемый раствор (а) и испытуемый раствор (b) готовят согласно методике из промышленной серии препарата.
Приготовление испытуемого раствора плацебо препарата. По технологии препарата «Амизон, капсулы 0,5 г» готовят его порошковое плацебо, не содержащее определяемого компонента (амизон). 15 мг порошкового плацебо препарата помещают в мерную колбу вместимостью 100,0 мл, встряхивают с 96 % спиртом Р в течение 3 мин, доводят до метки тем же растворителем и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор не больше 0,45 мкм. 1,0 мл полученного раствора доводят 96 % спиртом Р до 10,0 мл.
Для исследования используют хроматографическую пластину Silica gel 60 фирмы «Merck». На линию старта хроматографической пластины наносят по 20 мкл модельных растворов (М1 - М5), испытуемого раствора (а), испытуемого раствора (b), раствора сравнения (а), раствора сравнения (с) и испытуемого раствора плацебо препарата. Подвижная фаза - ацетон-метанол-вода (8:2:1), проявитель - пары йода.
Результаты и обсуждение.
Как известно, качество лекарственного препарата закладывается при его разработке, поэтому состав и количество примесей в субстанции обусловлено методом синтеза [2-4]. Промышленный синтез амизона может сопровождаться образованием ряда сопутствующих примесей, одной из которых является полупродукт - бензиламид изоникотиновой кислоты [5,6]. Допустимое количество этой примеси регламентируется в количестве 0,5%. Оптимальным для ее определения является метод тонкослойной хроматографии. В соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Украины (ГФУ) по валидации методик определения примесей в план исследований мы включили такие валидационные характеристики как специфичность, пригодность хроматографической системы и предел обнаружения.
Пределы диапазона применения методики в соответствии с требованиями ГФУ определены как 20 % - 100 % относительно предельно допустимого содержания по примеси N (0,05 мг/мл).
Специфичность. В условиях методики были исследованы испытуемый раствор плацебо препарата, испытуемый раствор (а), испытуемый раствор (b) и раствор сравнения (а). Специфичность методики обосновывается путем доказательства отсутствия влияния компонентов плацебо и любых других продуктов из субстанции амизона на результаты анализа. Отсутствие дополнительных пятен на хроматограмме испытуемого раствора плацебо и раствора сравнения (a) свидетельствует о достаточной специфичности методики.
Пригодность хроматографической системы. По результатам проведенной визуальной оценки полученных хроматограмм установлено, что на хроматограмме раствора сравнения (с) четко видно пятно. Таким образом, условие проверки пригодности хроматографической системы выполняется.
Предел обнаружения. Для исследования предела обнаружения были приготовлены пять модельных растворов с концентрациями амизона 0,01 - 0,05 мг/мл (20 - 100 % относительно предельно допустимого содержания по примеси N). Как показали результаты экспериментальных исследований, пятно видно на хроматограме модельного раствора (М2) с концентрацией АФИ 0,02 мг/мл. Следовательно, предел обнаружения методики составляет 0,4 %.
Выводы
- Проведена валидация методики опеределения сопутствующих примесей в капсулах амизон методом тонкослойной хроматографии.
- Изученный валидационные характеристики - специфичность, пригодность хроматографической системы и предел обнаружения подтвердили премлемость предложенной методики для определения возможного полупродукта синтеза в регламентированных пределах.
ЛИТЕРАТУРА
- Державна фармакопея Украіни/ Державне підприемство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 1-е вид. - Доповнення 1. - Х.: РІРЕГ, 2008. - 556 с.
- Patel H. A Comprehensive Review on Quality by Design (QbD) in Pharmaceuticals / H. Patel, S. Parmar, B. Patel // Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res. - 2013. - Vol. 21, № 37. P. 223-236.
- Impurity profile: Significance in Active Pharmaceutical Ingredient Sanjay / B. Bari, B. R. Kadam, Y. S. Jaiswal, A. A. Shirkhedkar// Eurasian J. Anal. Chem. - 2007. - Vol. 2, № 1. - Р. 32-53
- Guidance for Industry Q11 Development and Manufacture of Drug Substances ICH 2012http://www.fda.gov/Dmgs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/default htm
- Георгиянц В.А., Кушнирук В.Н., Гарная Н.В.. Обоснование выбора растворителя при промышленном производстве субстанции йодметилата бензиламида изоникотиновой кислоты // Запорожский медицинский журнал. - 2014. - № 4 (85). - С. 86-89
- Кушнірук В.М., Георгіянц В.А., Гарна Н.В. Опрацювання лабораторно! технологи одержання субстанці! амізону для !! використання у промислових умовах // Фармацевтичний часопис. - 2013.- № 4 (29). - С.12-15.