Определение гипотензивного лекарственного средства бисопролол в плазме крови человека методом вэжх-мс/мс

АННОТАЦИЯ

В статье представлена методика определения в плазме крови человека гипотензивного лекарственного средства бисопролол с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). Аналитический диапазон методики составил 8,45-4225,20 нг/мл и позволяет проводить количественное определение бисопролола при исследованиях фармакокинетики, терапевтическом мониторинге, допинг-контроле, анализе острых отравлений и в судебно-химической практике.

Ключевые слова: бисопролол, ВЭЖХ-МС/МС, гипотензивные лекарственные средства, биоаналитические исследования, острые отравления

Цель исследования.

Бисопролол включен в список жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, утвержденный Правительством Российской Федерации на 2014 год и в Государственный Реестр лекарственных средств Республики Казахстан, что делает его одним из самых часто применяемых препаратов для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Целью исследования являлась разработка методики определения бисопролола в плазме крови человека с помощью метода

ВЭЖХ-МС/МС, пригодной для проведения исследований фармакокинетики, терапевтического лекарственного мониторинге, допинг-контроля, анализа острых отравлений и в судебно-химической практике.

Материалы и методы.

Для определения бисопролола при проведении биоаналитических исследований используются различные аналитические методы, в первую очередь хроматографические.[1-4] Ранее была продемонстрирована невозможность применения таких методов, как тонкослойная хроматография (ТСХ) и газовая хроматография (ГХ) без дериватизации для количественного определения бисопролола. [5, 6] Таким образом, для количественного определения бисопролола в плазме крови человека был выбран метод ВЭЖХ-МС/МС.

При разработке методики и при количественном определении образцов плазмы больных с острыми отравлениями пробоподготовку проводили с помощью осаждения белков ацетонитрилом. Для этой цели к 500 мкл плазмы больных или к 400 мкл чистой плазмы с добавлением 100 мкл стандартного раствора бисопролола до получения концентраций 8,45, 42,25, 84,50, 422,52, 845,04, 2112,60 и 4225,20 нг/мл, прибавляли 700 мкл ацетонитрила, встряхивали в течение 30 с на шейкере, далее центрифугировали в течение 15 минут со скоростью 13500 об/мин, надосадочную жидкость отбирали в виалы объемом 1,5 мл.

Количественное определение полученных проб проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе LCMS-8040, SHIMADZU CORPORATION, Япония, оснащенном градиентным насосом, термостатом колонок и образцов, дегазатором, автосамплером, тандемным масс-спектрометрическим детектором. Обработку данных проводили при помощи программного обеспечения LabSolutions (Ver. 5.3), SHIMADZU CORPORATION, Япония. Подвижная фаза: 0,1% раствор муравьиной кислоты и 1 ммоль/л формиат аммония в воде, (А) /0,1% раствор муравьиной кислоты и 1 ммоль/л формиат аммония в метаноле (Б) (40:60). Скорость потока подвижной фазы: 0,8 мл/мин. Неподвижная фаза: хроматографическая колонка Zorbax Eclipse Plus C18 150*4,6мм 5 мкм с предколонкой Zorbax Eclipse Plus C18 12,5*4,6мм 5 мкм, при температуре 40оС. Объем вводимой пробы: 10 мкл. Время хроматографирования: 15 мин. Детектирование: мониторинг множественных реакций (multiple reactions monitoring, MRM), режим положительной ионизации, ион-предшественник m/z 326,30, дочерние ионы m/z 222,20 и m/z 116,1. Время удерживания бисопролола: около 6,5 мин.

Результаты и обсуждение.

Разработанная методика определения бисопролола в плазме крови человека была валидирована на основе руководств FDA, ЕМА и руководства по экспертизе ЛС под ред. А. Н. Миронова (том I). [7] По результатам проведенной валидации методика демонстрирует селективность. Линейный диапазон методики составляет 8,45-4225,20 нг/мл плазмы (Рис. 1). Коэффициент линейной корреляции составил 0,9999.

При определении правильности и прецизионности на уровнях intra-day и inter-day относительная погрешность и относительное стандартное отклонение не превышали 7,72% и 11,47%, соответственно. Полученные значения укладываются в норму (не более 20% для нижних точек диапазона линейности и не более 15% для остальных точек).

На рисунке 2 продемонстрирован пример определения концентрации больного, госпитализированного с подозрением на острое отравление гипотензивными лекарственными средствами. С помощью предложенной методики была определена концентрация бисопролола в плазме крови, она составила 51,51 нг/мл, что соответствует максимальной терапевтической концентрации бисопролола в плазме и может наблюдаться при острых отравлениях спустя несколько часов после приёма препарата.

ВЫВОДЫ.

Разработанная методика количественного определения бисопролола в плазме крови методом ВЭЖХ-МС/МС. По результатам проведенной валидации данная методика линейна, демонстрирует правильность и прецизионность измерений в диапазоне 8,45-4225,20 нг/мл, что позволяет применять её для решения таких задач как

 

ЛИТЕРАТУРА

  1. K. Czerwinska, E. Wyszomirska, T. Kaniewska. Identification and determination of selected medicines reducing hypertention by densitometric and gas chromatographic methods // Acta Poloniae Phurmaceutica - Drug Research. 2001. № 58 (5). P. 331-338.
  2. Comparison of the analysis of в-blockers by different techniques / E. Pujos et al. // Journal of Chromatography B. 2009. № 877. P. 4007-4014.
  3. LC-MS/MS method for the determination of several drugs used in combined cardiovascular therapy in human plasma / Oskar Gonzalez et al. // Journal of Chromatography B. 2010. № 878. P. 2685-2692.
  4. Development of an LC-MS/MS method for the quantitation of 55 compounds prescribed in combined cardiovascular therapy / Oskar Gonzalez et al. // Journal of Chromatography B. 2011. № 879. P. 243-252.
  5. Е.С. Мельников, М.В. Белова Разработка методики лабораторной диагностики острых отравлений гипотензивными лекарственными средствами // Сеченовский вестник. - Москва, 2012. - №3 (9). С. 4649.
  6. Е.С. Мельников, М.В. Белова, Г.В. Раменская. Анализ острых отравлений некоторыми гипотензивными лекарственными веществами методом газовой хроматографии/масс-спектрометрии // Масс-спектрометрия. 2014. Т. 11. № 2. С. 81-88.
  7. Руководство по экспертизе лекарственных средств под ред. проф. А. Н. Миронова. Том I. / М.: Гриф и К, 2013.
Год: 2014
Город: Шымкент
Категория: Медицина