Хромато-масс-спектрометрическое исследование карбоновых кислот экстракта травы veronica longifolia l.

АННОТАЦИЯ

Впервые был изучен кислотный состав экстракта травы Veronica longifolia L., полученного методом непрерывной циркуляционной экстракции (экстрагент этилацетат). В процессе хромато-масс-спектрометрического исследования качественного и количественного содержания карбоновых кислот экстракта было детерминировано 30 органических кислот. Среди идентифицированных 24 алифатических и 6 ароматических кислот. Общее содержание кислот в экстракте составило 4,01%. Как биологически активные соединения, значение имеют левулиновая, азелаиновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, особенно - ароматическая бензойная, фенолкарбоновая салициловая и гидроксикоричная феруловая кислоты, обладающие разнообразной фармакологической активностью.

Ключевые слова: Veronica longifolia L., алифатические кислоты, ароматические кислоты, жирные кислоты, хромато-масс-спектрометрия.

Veronica L. больший род семейства Plantaginaceae, согласно одних источников насчитывает 500 видов в мировой флоре, согласно других - около 300, более 60 представлено в флоре Украины [6], официальных видов нет. Во многих публикациях на основе молекулярно-филогенетических данных ряд растений семейства Plantaginaceae приводится под названием Veronicaceae Durande. Раньше род Veronica принадлежал к семейству Норичниковые (Scrophulariaceae), иногда его выделяли в отдельное семейство Верониковые (Veronicaceae) [4,7,8].

V. longifolia L., как и другие представители рода, перспективные источники биологически активных веществ (БАВ) [1], что подтверждают проведенные нами предварительные исследования [5]. Органические кислоты обладают различной фармакологической активностью и оказывают существенное влияние на суммарную терапевтическую активность растительных комплексов БАВ, что создает предпосылки для дальнейшего углубленного исследования БАВ вероники длиннолистной.

Представители рода Veronica издавна использовались в народной медицине при различных заболеваниях верхних дыхательных путей, как отхаркивающее и противовоспалительное, желчегонное и спазмолитическое при заболеваниях печени, и наружно при инфицированных ранах и излишней потливости [2,3].

Целью нашей работы стало хромато-масс-спектрометрическое исследование кислотного состава экстракта травы Veronica longifolia L.

Материалы и методы. Объект исследования - воздушно-сухая трава V. longifolia L., заготовленная в фазе цветения в Харьковской области в 2012 году. Экстракт был получен методом исчерпывающей циркуляционной экстракции этилацетатом в аппарате Сокслета, после обезжиривания сырья хлороформом. Полученный экстракт упаривали до удаления экстрагента.

Хромато-масс-спектрометрическое исследование органических кислот экстракта полученного из травы V. longifolia L. проводили на хроматографе Agilent Technology HP6890 GC с масс-спектрометрическим детектором 5973N. Точную навеску высушенного экстракта помещали в виалу на 2 мл и прибавляли внутренний стандарт (50 мкг тридекана в гексане) и 1,0 мл метилирующего агента - 14% BCl3 в метаноле, Supelco №3-3033.

Смесь выдерживали в герметично закрытой виале 8 часов при 65 °С. В это время с экстракта полностью экстрагируются жирные кислоты и проходит переэтерификация кислот. Реакционную смесь сливали и разбавляли 1 мл дистиллированной воды. Для получения метиловых эстеров кислот добавляли 0,2 мл хлористого метилена, встряхивали в течение 1 часа и затем проводили исследование.

Введение пробы 2 мкл в хроматографическую колонку проводили в режиме splitless (без разделения потока), что позволяет ввести пробу без потерь на разделение и существенно в 20 раз увеличить чувствительность метода хроматографирования. Скорость введения пробы- 1 мл/мин, термин - 0,2хв.

Детектор - масс-спектрометра - квадруполь, способ ионизации электронный удар (EI), энергия ионизации 70 еВ, для анализа использовали режим регистрации полного ионного тока. Для разделения использовали капиллярную колонку HP-INNOWAX, (30м*250мкм). Неподвижная фаза - INNOWAX. Подвижная фаза - гелий, скорость потока газа 1 мл/мин. Температура нагревателя введения пробы - 250 °С. Температура термостата программируется от 50 до 250 °С.

Идентификацию метиловых эстеров кислот проводили на основании расчета эквивалентной длины алифатической цепочки (ECL); с использованием данных библиотеки масс-спектров NIST 05 и Willey 2007 с общим количеством спектров более 470000 в сочетании с программами для идентификации AMDIS и NIST; также сравнивали время удерживания с временем удержания стандартных веществ (Sigma).

Для расчёта количественного определения компонентов использовали формулу: C=K1*K2*1000 (мг/кг), где: К1=П1/П2 (П1 площадь пика исследуемого вещества, П2 - площадь пика стандарта); К2=5О/М, (50 - масса внутреннего стандарта, введенного в исследуемый образец, мкг; М - навеска исследуемого образца, мг); С - содержание жирных кислот в сырье, мг/кг.

Таблица 1 - Органические кислоты экстракта с травы Veronica longifolia L.

№ п/п

Время

удерживания, мин

Название вещества

Количественное содержание

мг/кг

%

1

3

4

5

6

1

5.882

Капроновая

148,55

0,37

2

8.024

2-Гексеновая

45,82

0,11

3

10.333

Октановая

218,38

0,55

4

10.773

Щавелевая

108,27

0,27

5

12.758

Нонановая

33,82

0,08

6

14.543

Левулиновая

124,98

0,31

7

15.123

Янтарная

182,44

0,46

8

15.179

Декановая

56,27

0,14

9

15.748

Бензойная

316,26

0,79

10

18.809

Фенилуксусная

51,17

0,13

11

19.116

Салициловая

17,78

0,04

12

19.797

Лауриновая

447,60

1,12

13

24.213

Миристиновая

1527,37

3,81

14

25.251

Коричная

140,07

0,35

15

26.422

Азелаиновая

620,88

1,55

16

28.63

Пальмитиновая

11130,58

27,76

17

29.199

Пальмитолеиновая

801,86

2,00

18

30.236

Гептадекановая

109,17

0,27

19

31.837

3,4- Диметоксибензойная

284,38

0,71

20

32.328

Стеариновая

578,90

1,44

21

32.573

Олеиновая

401,29

1,00

22

33.309

Линолевая

6733,83

16,80

23

34.414

Линоленовая

12294,54

30,66

24

35.077

Арахиновая

959,25

2,39

25

35.58

2-Гидроксипальмитиновая

105,63

0,26

26

36.483

Хенейкозановая

110,45

0,28

27

38.133

Бегеновая

1100,26

2,74

28

39.433

Трикозановая

223,46

0,56

29

41.011

Лигноцериновая

1032,24

2,58

30

42.489

Феруловая

189,16

0,47

Всего:

40094,66

100

Хроматографический профиль органических кислот экстракта полученного с травы Veronica longifolia L. приведен на рис.1.

Относительное содержание кислот в экстракте рассчитывали также в процентах от их общего содержания. Полученные результаты подвергали статистической обработке.

Результаты и обсуждение. В результате исследования нами было идентифицировано и установлено содержание 30 органических кислот. Среди идентифицированных 24 алифатических та 6 ароматических кислот (табл. 1).

Общее содержание кислот в экстракте составляет 40094,66 мг/кг (4,01%). Содержание алифатических кислот в общей сумме кислот 4,11%, ароматических - 2,49%, жирных - 93,40%. Среди жирных кислот идентифицированны 2 моно-ненасыщенные - пальмитолеиновая и олеиновая, 2 полиненасыщенных - линолевая и линоленовая. Сумма ненасыщенных жирных кислот составила 52,46%.

Среди жирных кислот преобладают полиненасыщенные кислоты - линолевая (16,80%) и линоленовая (30,66%), а также насыщенная пальмитиновая (27,76%).

Превалирующими ароматическими - бензойная кислота (0,79%) и ее производное 3,4- диметоксибензойная (0,71%).

Среди идентифицированных 24 алифатических кислот; 6 ароматических кислот представлены бензойной, 3,4-диметоксибензойной, фенилуксусной, коричной (циннамовой), фенолкарбоновой - салициловой и гидроксикоричной - феруловой.

Общее содержание кислот в экстракте составило 4,01%.Как биологически активные соединения, имеют значение кислоты - левулиновая, азелаиновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, особенно, ароматические - бензойная, салициловая и феруловая, обладающие разнообразной фармакологической активностью.

ВЫВОДЫ

1. Впервые был изучен кислотный состав экстракта травы Veronica longifolia L., который представлен 24 алифатическими и 6 ароматическими кислотами. Содержание низкомолекулярных алифатических кислот в общей сумме кислот - 4,11%, ароматических - 2,49%, жирных - 93,40%. Общее содержание кислот в экстракте составило 40094,66 мг/кг (4,01%).

2. Содержание таких кислот, как левулиновая, азелаиновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, бензойная, салициловая, феруловая, свидетельствуют о перспективности дальнейших фитохимических исследований травы Veronica longifolia L.

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Albach D.C., Grayer R.J., Jensen S.R., Ozgokce F., Veitch N.C. Acylated flavone glycosides from Veronica L. Phytochemistry. 2003. Т. 64. № 7. Р. 1295-1301.
  2. E. J. Park et al. Pharmacokinetics of Verproside after Intravenous and Oral Administration in Rats Archives of Pharmacal Reseach. 2009, Vol.32, № 4, P. 559-564.
  3. Harpet U.S., Genc Y., Khan N. Radical Scavenging Effects of Different Veronica Species. Records of natural product. 2011, V.5, №2, P. 100-107.
  4. Nina Ronsted, Mark W. Chase, Dirk C. Albach and Maria Angelica Bello. Phylogenetic relationships within Plantago (Plantaginaceae): evidence from nuclear ribosomal ITS and plastid trnL-F sequence data. Botanical Journal of the Linnean Society. 2002ю № 139, P. 323-338.
  5. Osmachko A.P. Gas chromatographic-mass spectrometric studies of organic acids of Veronica longifolia L. / Osmachko A.P., Kovaleva A.M., Koshovyy O.N., Goryachaya O.V. // The Pharma Innovation - 2013- Vol.2 № 10.2013 - С. 42-46.
  6. Richard G. Hawke, Comparative Studies of Veronica and Veronicastrum. Plant Evaluation Notes. ISSUE 33, - 2010 - 8 р.
  7. Taskova R.M., Gotfredsen C.H., Jensen S.R. Chemotaxonomy of Veroniceae and its allies in the Plantaginaceae. Phytochemistry. 2006 Feb;67(3):286-301.
  8. Еленевський А.Г.Систематика и география вероник СССР и прилежащих стран.- М: «Наука», 1978 - 259с.
Год: 2014
Город: Шымкент
Категория: Медицина