АННОТАЦИЯ
Впервые был изучен кислотный состав экстракта травы Veronica longifolia L., полученного методом непрерывной циркуляционной экстракции (экстрагент этилацетат). В процессе хромато-масс-спектрометрического исследования качественного и количественного содержания карбоновых кислот экстракта было детерминировано 30 органических кислот. Среди идентифицированных 24 алифатических и 6 ароматических кислот. Общее содержание кислот в экстракте составило 4,01%. Как биологически активные соединения, значение имеют левулиновая, азелаиновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, особенно - ароматическая бензойная, фенолкарбоновая салициловая и гидроксикоричная феруловая кислоты, обладающие разнообразной фармакологической активностью.
Ключевые слова: Veronica longifolia L., алифатические кислоты, ароматические кислоты, жирные кислоты, хромато-масс-спектрометрия.
Veronica L. больший род семейства Plantaginaceae, согласно одних источников насчитывает 500 видов в мировой флоре, согласно других - около 300, более 60 представлено в флоре Украины [6], официальных видов нет. Во многих публикациях на основе молекулярно-филогенетических данных ряд растений семейства Plantaginaceae приводится под названием Veronicaceae Durande. Раньше род Veronica принадлежал к семейству Норичниковые (Scrophulariaceae), иногда его выделяли в отдельное семейство Верониковые (Veronicaceae) [4,7,8].
V. longifolia L., как и другие представители рода, перспективные источники биологически активных веществ (БАВ) [1], что подтверждают проведенные нами предварительные исследования [5]. Органические кислоты обладают различной фармакологической активностью и оказывают существенное влияние на суммарную терапевтическую активность растительных комплексов БАВ, что создает предпосылки для дальнейшего углубленного исследования БАВ вероники длиннолистной.
Представители рода Veronica издавна использовались в народной медицине при различных заболеваниях верхних дыхательных путей, как отхаркивающее и противовоспалительное, желчегонное и спазмолитическое при заболеваниях печени, и наружно при инфицированных ранах и излишней потливости [2,3].
Целью нашей работы стало хромато-масс-спектрометрическое исследование кислотного состава экстракта травы Veronica longifolia L.
Материалы и методы. Объект исследования - воздушно-сухая трава V. longifolia L., заготовленная в фазе цветения в Харьковской области в 2012 году. Экстракт был получен методом исчерпывающей циркуляционной экстракции этилацетатом в аппарате Сокслета, после обезжиривания сырья хлороформом. Полученный экстракт упаривали до удаления экстрагента.
Хромато-масс-спектрометрическое исследование органических кислот экстракта полученного из травы V. longifolia L. проводили на хроматографе Agilent Technology HP6890 GC с масс-спектрометрическим детектором 5973N. Точную навеску высушенного экстракта помещали в виалу на 2 мл и прибавляли внутренний стандарт (50 мкг тридекана в гексане) и 1,0 мл метилирующего агента - 14% BCl3 в метаноле, Supelco №3-3033.
Смесь выдерживали в герметично закрытой виале 8 часов при 65 °С. В это время с экстракта полностью экстрагируются жирные кислоты и проходит переэтерификация кислот. Реакционную смесь сливали и разбавляли 1 мл дистиллированной воды. Для получения метиловых эстеров кислот добавляли 0,2 мл хлористого метилена, встряхивали в течение 1 часа и затем проводили исследование.
Введение пробы 2 мкл в хроматографическую колонку проводили в режиме splitless (без разделения потока), что позволяет ввести пробу без потерь на разделение и существенно в 20 раз увеличить чувствительность метода хроматографирования. Скорость введения пробы- 1 мл/мин, термин - 0,2хв.
Детектор - масс-спектрометра - квадруполь, способ ионизации электронный удар (EI), энергия ионизации 70 еВ, для анализа использовали режим регистрации полного ионного тока. Для разделения использовали капиллярную колонку HP-INNOWAX, (30м*250мкм). Неподвижная фаза - INNOWAX. Подвижная фаза - гелий, скорость потока газа 1 мл/мин. Температура нагревателя введения пробы - 250 °С. Температура термостата программируется от 50 до 250 °С.
Идентификацию метиловых эстеров кислот проводили на основании расчета эквивалентной длины алифатической цепочки (ECL); с использованием данных библиотеки масс-спектров NIST 05 и Willey 2007 с общим количеством спектров более 470000 в сочетании с программами для идентификации AMDIS и NIST; также сравнивали время удерживания с временем удержания стандартных веществ (Sigma).
Для расчёта количественного определения компонентов использовали формулу: C=K1*K2*1000 (мг/кг), где: К1=П1/П2 (П1 площадь пика исследуемого вещества, П2 - площадь пика стандарта); К2=5О/М, (50 - масса внутреннего стандарта, введенного в исследуемый образец, мкг; М - навеска исследуемого образца, мг); С - содержание жирных кислот в сырье, мг/кг.
Таблица 1 - Органические кислоты экстракта с травы Veronica longifolia L.
|
№ п/п |
Время удерживания, мин |
Название вещества |
Количественное содержание |
|
|
мг/кг |
% |
|||
|
1 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
1 |
5.882 |
Капроновая |
148,55 |
0,37 |
|
2 |
8.024 |
2-Гексеновая |
45,82 |
0,11 |
|
3 |
10.333 |
Октановая |
218,38 |
0,55 |
|
4 |
10.773 |
Щавелевая |
108,27 |
0,27 |
|
5 |
12.758 |
Нонановая |
33,82 |
0,08 |
|
6 |
14.543 |
Левулиновая |
124,98 |
0,31 |
|
7 |
15.123 |
Янтарная |
182,44 |
0,46 |
|
8 |
15.179 |
Декановая |
56,27 |
0,14 |
|
9 |
15.748 |
Бензойная |
316,26 |
0,79 |
|
10 |
18.809 |
Фенилуксусная |
51,17 |
0,13 |
|
11 |
19.116 |
Салициловая |
17,78 |
0,04 |
|
12 |
19.797 |
Лауриновая |
447,60 |
1,12 |
|
13 |
24.213 |
Миристиновая |
1527,37 |
3,81 |
|
14 |
25.251 |
Коричная |
140,07 |
0,35 |
|
15 |
26.422 |
Азелаиновая |
620,88 |
1,55 |
|
16 |
28.63 |
Пальмитиновая |
11130,58 |
27,76 |
|
17 |
29.199 |
Пальмитолеиновая |
801,86 |
2,00 |
|
18 |
30.236 |
Гептадекановая |
109,17 |
0,27 |
|
19 |
31.837 |
3,4- Диметоксибензойная |
284,38 |
0,71 |
|
20 |
32.328 |
Стеариновая |
578,90 |
1,44 |
|
21 |
32.573 |
Олеиновая |
401,29 |
1,00 |
|
22 |
33.309 |
Линолевая |
6733,83 |
16,80 |
|
23 |
34.414 |
Линоленовая |
12294,54 |
30,66 |
|
24 |
35.077 |
Арахиновая |
959,25 |
2,39 |
|
25 |
35.58 |
2-Гидроксипальмитиновая |
105,63 |
0,26 |
|
26 |
36.483 |
Хенейкозановая |
110,45 |
0,28 |
|
27 |
38.133 |
Бегеновая |
1100,26 |
2,74 |
|
28 |
39.433 |
Трикозановая |
223,46 |
0,56 |
|
29 |
41.011 |
Лигноцериновая |
1032,24 |
2,58 |
|
30 |
42.489 |
Феруловая |
189,16 |
0,47 |
|
Всего: |
40094,66 |
100 |
||
Хроматографический профиль органических кислот экстракта полученного с травы Veronica longifolia L. приведен на рис.1.
Относительное содержание кислот в экстракте рассчитывали также в процентах от их общего содержания. Полученные результаты подвергали статистической обработке.
Результаты и обсуждение. В результате исследования нами было идентифицировано и установлено содержание 30 органических кислот. Среди идентифицированных 24 алифатических та 6 ароматических кислот (табл. 1).
Общее содержание кислот в экстракте составляет 40094,66 мг/кг (4,01%). Содержание алифатических кислот в общей сумме кислот 4,11%, ароматических - 2,49%, жирных - 93,40%. Среди жирных кислот идентифицированны 2 моно-ненасыщенные - пальмитолеиновая и олеиновая, 2 полиненасыщенных - линолевая и линоленовая. Сумма ненасыщенных жирных кислот составила 52,46%.
Среди жирных кислот преобладают полиненасыщенные кислоты - линолевая (16,80%) и линоленовая (30,66%), а также насыщенная пальмитиновая (27,76%).
Превалирующими ароматическими - бензойная кислота (0,79%) и ее производное 3,4- диметоксибензойная (0,71%).
Среди идентифицированных 24 алифатических кислот; 6 ароматических кислот представлены бензойной, 3,4-диметоксибензойной, фенилуксусной, коричной (циннамовой), фенолкарбоновой - салициловой и гидроксикоричной - феруловой.
Общее содержание кислот в экстракте составило 4,01%.Как биологически активные соединения, имеют значение кислоты - левулиновая, азелаиновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, особенно, ароматические - бензойная, салициловая и феруловая, обладающие разнообразной фармакологической активностью.
ВЫВОДЫ
1. Впервые был изучен кислотный состав экстракта травы Veronica longifolia L., который представлен 24 алифатическими и 6 ароматическими кислотами. Содержание низкомолекулярных алифатических кислот в общей сумме кислот - 4,11%, ароматических - 2,49%, жирных - 93,40%. Общее содержание кислот в экстракте составило 40094,66 мг/кг (4,01%).
2. Содержание таких кислот, как левулиновая, азелаиновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, бензойная, салициловая, феруловая, свидетельствуют о перспективности дальнейших фитохимических исследований травы Veronica longifolia L.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Albach D.C., Grayer R.J., Jensen S.R., Ozgokce F., Veitch N.C. Acylated flavone glycosides from Veronica L. Phytochemistry. 2003. Т. 64. № 7. Р. 1295-1301.
- E. J. Park et al. Pharmacokinetics of Verproside after Intravenous and Oral Administration in Rats Archives of Pharmacal Reseach. 2009, Vol.32, № 4, P. 559-564.
- Harpet U.S., Genc Y., Khan N. Radical Scavenging Effects of Different Veronica Species. Records of natural product. 2011, V.5, №2, P. 100-107.
- Nina Ronsted, Mark W. Chase, Dirk C. Albach and Maria Angelica Bello. Phylogenetic relationships within Plantago (Plantaginaceae): evidence from nuclear ribosomal ITS and plastid trnL-F sequence data. Botanical Journal of the Linnean Society. 2002ю № 139, P. 323-338.
- Osmachko A.P. Gas chromatographic-mass spectrometric studies of organic acids of Veronica longifolia L. / Osmachko A.P., Kovaleva A.M., Koshovyy O.N., Goryachaya O.V. // The Pharma Innovation - 2013- Vol.2 № 10.2013 - С. 42-46.
- Richard G. Hawke, Comparative Studies of Veronica and Veronicastrum. Plant Evaluation Notes. ISSUE 33, - 2010 - 8 р.
- Taskova R.M., Gotfredsen C.H., Jensen S.R. Chemotaxonomy of Veroniceae and its allies in the Plantaginaceae. Phytochemistry. 2006 Feb;67(3):286-301.
- Еленевський А.Г.Систематика и география вероник СССР и прилежащих стран.- М: «Наука», 1978 - 259с.