Важным направлением в создании новых лекарственных средств растительного происхождения является разработка технологий, позволяющих максимально извлечь биологически активных веществ (БАВ) из исходного сырья. Экстракция БАВ с помощью диоксида (IV) углерода - это сравнительно новый вид извлечения БАВ из сырья растительного или животного происхождения. В данном обзоре представлена информация об изучений компонентного состава СО2-экстракта коры Ивы применением газо-жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией.
Введение: Народная медицина Казахстана в лечении воспалительных заболеваний широко использует лекарственные растение, такие как Тополь, Осина, Ива и другие [1]. Большой интерес для исследования представляет салицилсодержащее растение - представитель семейства ивовых (Salicaceae) - Ива.
Ива - деревянистое растение; семейство - Ивовые. Представляет дерево, которое достигает 25 - 30 метров, а в молодом возрасте - кустарник, в полярных странах и нагорных областях встречаются Ивы - карлики. Крона у Ивы полусферическая, развесистая, гладкая кора имеет сероватый цвет, ветки очень гибкие и тонкие, вырастают до 2 м [2]. Существует огромное количество разновидностей данного растения в Казахстане. В Иле-Балхашском регионе насчитывается 9 видов Ивы (Salix): Ива каспийская (S.caspica Pail.), Ива белая (ветла, S.alba L.), Ива вильгельмса (S. wilhelmsiana Bieb), Ива джунгарская (S. Songarica Andress), Ива прутовидная (S. viminalis), Ива туранская (S. turanica) и др. [3].
Экстракты из Ивы широко используются в фитотерапии многих стран и обладают антиревматическими, антисептическими, противовоспалительными, обезболивающими свойствами [4]. Также доказано, что экстракт коры Ивы ингибирует рост раковых клеток человека in vivo и in vitro [5].
Кора Ивы включена в Европейскую, Британскую и Американскую травяную фармакопеи. К числу фармакопейных растений, согласно Европейской фармакопее (ЕФ), относятся Ива волчниковая (S. daphnoidesVill), пурпурная (S. purpureaL.), ломкая (S. fragilisL.) и другие виды, содержащие более 1.5% салицина (после щелочного гидролиза). В качестве сырья используется кора молодых ветвей или целые однолетние ветки диаметром не более 10мм. В Германии зарегестрированы: 3 лекарственных средства (ЛС), содержащих сухой экстракт ивы как единственное действующее вещество - «Assalix», «Optovit actiFLEX» и «Proactiv». Во Франции на фармацевтическом рынке представлены 5 наименований ЛС, содержащих Иву: капсулы с одним действующим веществом - экстрактом коры Ивы. В Российской Федерации Ива не является фармакопейным растением. однако проводится химическое изучение представителей этого рода, а также исследования по стандартизации сырья, что можно считать предпосылкой для его широкого внедрения в медицинкскую практику [6].
В Казахстане на сегодняшний день зарегестрировано только одно ЛС, содержащее препараты Ивы - «Инсти» (Пакистан). Оно представляет собой травяные гранулы, содержащие густой водный экстракт нескольких растений, основное из которых - кора Ивы белой.
Важным направлением в создании новых лекарственных средств растительного
происхождения является разработка технологий, позволяющих максимально извлечь БАВ из исходного сырья. Экстракция биологически активных веществ с помощью диоксида (IV) углерода - это сравнительно новый вид извлечения БАВ из сырья растительного или животного происхождения. Исследования докритического углекислотного экстракта представляет как практический, так и теоретический интерес, вследствие малой изученности компонентного состава подобных извлечений. Вместе с появлением новых технологий, в том числе СО2 -
экстракции из сырья, повышаются требования, предъявляемые к качеству, как растительного сырья, так и к лекарственным средствам, созданным на основе полученных экстрактов. В связи с этим актуальным направлением современного фармацевтического анализа является разработка методов контроля качества биологически активных веществ, содержащихся в докритическом СО2- экстракте коры Ивы.
Цель настоящей работы - изучение химического состава СО2-экстракта коры Ивы белой, полученного в докритических условиях.
Методы исследования.
Материал для исследования был собран в пос. Остемир (Алматинская область, Талгарский район) в марте месяце 2016 г. Собранное сырье высушено в проветриваемом помещении в тени при комнатной температуре.
Докритическую СО2-экстракцию проводили из высушенной и измельченной коры S.alba L. при следующих параметрах:
Экстракционная масса 2700 гр. Рабочее давление 70 — 72 атм.
Температура экстракции 20 — 210С Время экстракции 21 ч.
Выход экстракта 24 гр.
Исследования компонентного состава СО2-экстракта коры Ивы белой проводили на газовом хроматографе Agilent с масс-спектрометрическим детектором Agilent 7890А/5975С.
- 024 г СО2-экстракта коры Ивы белой растворили в 2 мл хлороформа.
- мкл полученного раствора хроматографировали на газовом хроматографе, получая не менее 3 хроматограмм в следующих условиях:
- колонка: капиллярная кварцевая, размером 30 м х
- 25 мм с нанесенным слоем неподвижной фазы HP-5MS с толщиной слоя 0.25 мкм (Agilent) или аналогичная;
- температуру термостата колонки программируют от 75 0С (задержка 8 мин) до 250 0С (задержка 30 мин), прирост температуры - 4 0С/мин;
- температура блока испарителя - 270 0С, деления потока нет;
- настройка масс-детектора: диапазон
сканирования масс - 50 - 650; задержка -3 мин; режим ионизации - электронный удар (70 эВ);
- скорость газа-носителя (гелий): 3 мл/мин.
Для идентификации исследуемых веществ на хроматограмме полного ионного тока, полученного для испытуемого раствора, используют метод нормировки и библиотеку стандартных масс- спектров NIST (800000 масс-спектров), а также по линейным индексам удерживания. Идентификацию компонентов проводили с применением программы AMDIS. Результаты считали верными при совпадении масс-спектров (соотношения m/z основных ионов) и линейных индексов удерживания не менее чем на 80 %, * более 90 %.
Результаты и их обсуждение.
В результате исследования был получен густой экстракт, суммарный выход которого составил 0,9 %.
|
25 |
71.01 |
Стигмастан-3,5-диен |
396 |
2,97 |
|
26 |
73.12 |
Гентриаконтан |
436 |
1,20 |
|
27 |
74.72 |
dl-a-Токоферол (витамин Е)* |
430 |
6,06 |
- В СО2-экстракте коры Ивы белой, полученного в докритических условиях, выявлено 27 компонентов, 20 из них идентифицированы.
- Основными компонентами СО2-экстракта коры Ивы белой являются: октакозан - 33,36 %, гексакозан - 9,64 %, dl-a-токоферол (витамин Е) - 6,06 %, линолевая кислота - 2,45 %.
Углеводородные соединения являются важными компонентами натуральных растительных восков. a-токоферол является источником витамина Е. С терапевтической целью витамин Е применяют перорально, парентерально и местно при дерматомиозитах, мышечных дистрофиях, угрозе срыва беременности, нарушениях менструального цикла, некоторых дерматозах, спазмах периферических сосудов, нарушении функции половых органов у мужчин, псориазе. a-токоферол благодаря антиоксидантным свойствам применяется в комбинированном лечении сердечно-сосудистой патологии, заболеваний глаз, для снижения побочных эффектов при терапии
химиотерапевтическими лекарственными
препаратами. В педиатрической практике
эффективен при склеродермии и гипотрофии. Антиканцерогенные свойства альфа-токоферола используются для устранения клеток опухоли и повышения эффективности иммунной системы. a- токоферол является относительно нетоксичным веществом и не вызывает серьезных побочных эффектов при использовании в пределах терапевтических доз.
Линолевая кислота вместе с линоленовой кислотой относится к так называемым незаменимым жирным кислотам, необходимым для нормальной жизнедеятельности; в организм человека и животных эти кислоты поступают с пищей, главным образом в виде сложных липидов — триглицеридов и фосфатидов. Линолевая кислота относится к классу омега-6-ненасыщенных жирных кислот, поэтому организм человека способен синтезировать из неё относящуюся к этому же классу четырежды ненасыщенную арахидоновую жирную кислоту. В виде триглицерида линолевая кислота в значительных количествах (до 40—60 %) входит в состав многих растительных масел и животных жиров, например соевого, хлопкового, подсолнечного, льняного, конопляного масел, китового жира.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Грудзинская Л.М. Аннотированный список лекарственных растений Казахстана. - Алматы: 2014. - 200 с.
- Нестерова С.Г., Инелова З.А. Флора пустынь Иле-Балхашского региона. - Алматы: Қазақ университеті, 2012.-190 с.
- Differentiation of extractive and synthetic salicin. The 2H aromatic pattern of natural 2-hydroxybenzyl alcohol. / E. Brenna, G. Fronza, et al. // Journal of agricultural and food chemistry. - 2004. - V.52. - P.7747-7751.
- Hany A. El-Shemy, Ahmed M. Aboul-Enein, et al. Willow leaves' extracts contain anti-tumor agents effective against three cell types // PLoS One. - Giza: Public Library of Science, 2007. - №1. - Р. 13-18.
- Санникова Е.Г. Лекарственные средства и БАД, содержащие ИВУ: тенденция и перспективы // Фармация. - 2015. - № 5. - С.51 - 53.
- Е. С. Северин Биохимия: Учебник для ВУЗов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2003. - 374 с.