В статье приведены данные о качественном составе и количественном содержании органических кислот в траве коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского. В результате проведенного эксперимента было установлено наличие в траве данных видов коровяка 14 органических кислот. В исследуемых объектах наблюдалось высокое содержание лимонной, яблочной и феруловой кислот. Кроме того, в траве в большом количестве содержались малоновая, ванилиновая, янтарная и щавелевая кислоты.
Введение. Verbascum thapsus L. (коровяк обыкновенный) и Verbascum songaricum Schrenk (коровяк джунгарский) двулетние травянистые растения семейства норичниковые – Scrophulariaceae. Коровяк обыкновенный широко распространен на территории Европы, на Кавказе, Алтае, в Восточной Сибири, а также Средней Азии. Коровяк джунгарский растет в Средней Азии, Иране и на Кавказе [1, 3].
Химический состав коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского представлен иридоидами, флавоноидами, сапонинами, эфирным маслом, углеводами, в частности слизью [6, 11].
В Британской травяной фармакопее присутствует статья на листья коровяка обыкновенного. В Украине и в Казахстане трава коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского является неофицинальным сырьем. Поэтому актуальным является углубленное фитохимическое изучение данного сырья.
Органические кислоты имеют широкий спектр действия. Они проявляют антимикробную, иммуностимулирующую, антиоксидантную, противовоспалительную, гепатопротекторную, кардиопротекторную активность [4, 5, 7, 8, 9, 10].
Органические кислоты в траве коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского изучены недостаточно. Поэтому целесообразным было провести изучение качественного состава и количественного содержания органических кислот методом газовой хроматографии в траве двух видов коровяка, заготовленных в Украине и Республике Казахстан в июле 2014 года.
Цель исследования. Целью работы было изучение качественного состава и количественного содержания органических кислот в траве коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского методом газовой хроматографии.
Материалы и методы исследования. Определение качественного состава и количественного содержания органических кислот проводили методом газовой хроматографии.
Трава коровяка обыкновенного коровяка джунгарского была заготовлена в период цветения в 2014 г. в Украине и Казахстане.
50 мг сырья помещали в виалу на 2 мл, добавляли внутренний стандарт (50 мкг тридекана в гексане) и приливали 1 мл метилирующего агента (14% BCl3 в метаноле, Supelco 3-3033). Смесь выдерживали в герметично закрытой виале 8 часов при 65°С, затем фильтровали и добавляли 1 мл воды очищенной. Для извлечения метиловых эфиров жирных кислот прибавляли 0,2 мл хлористого метилена, встряхивали несколько раз в течение часа, а затем проводили хроматографирование.
Введение пробы (2 мкл) в хроматографическую колонку проводили в режиме splitless, то есть без деления потока, что позволяет ввести пробу без потери на деление и существенно (в 10-20 раз) увеличить чувствительность метода хроматографирования. Скорость введения пробы составляла 1,2 мл/мин в течение 0,2 мин.
При проведении анализа придерживались следующих условий хроматографирования: хроматограф Agilent Technologies 6890 с масс-спектрометрическим детектором 5973; хроматографическая колонка - капиллярная INNOWAX, внутренний диаметр 0,5 мм, длина 30 м; скорость газа-носителя (гелий) 1,2 мл/мин; температура нагревателя ввода пробы - 250ºС; программируемая температура термостата -от 50 до 250º С, со скоростью 4 град/мин.
Для идентификации компонентов использовалась библиотека масс-спектров NIST 05 и WILEY 2007 с общим количеством спектров более 470000 в сочетании с программами для идентификации AMDIS и NIST.
Для количественных расчетов использовался метод внутреннего стандарта [2].
Расчет содержания компонентов (С, мг/кг) проводили по формуле:
C = к ■ K -1000, где
К1=П1/П2 (П1 - площадь пика исследуемого вещества, П2 - площадь пика стандарта);
К2=50/М (50 - вес внутреннего стандарта (мкг), введенного в образец, М - навеска образца (мг)).
Результаты и обсуждение. В результате проведенных исследований установлено наличие в траве коровяка обыкновенного и траве коровяка джунгарского 14 органических кислот.
Результаты эксперимента приведены в таблице 1.
Таблица 1 - Количественное содержание органических кислот в траве коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского
|
№ п/п |
Соединение |
Содержание органических кислот мг/кг в траве |
|
|
коровяка обыкновенного |
коровяка джунгарского |
||
|
1. |
Капроновая кислота |
33,00 |
30,60 |
|
2. |
Щавелевая кислота |
326,30 |
305,20 |
|
3. |
Нонановая кислота |
25,30 |
24,50 |
|
4. |
Малоновая кислота |
455,90 |
518,00 |
|
5. |
Фумаровая кислота |
54,70 |
31,30 |
|
6. |
Янтарная кислота |
301,80 |
279,60 |
|
7. |
Бензойная кислота |
146,90 |
115,30 |
|
8. |
Фенилуксусная кислота |
17,00 |
25,00 |
|
9. |
Салициловая кислота |
45,60 |
43,70 |
|
10. |
Яблочная кислота |
1080,70 |
983,30 |
|
11. |
Азелаиновая кислота |
216,50 |
220,40 |
|
12. |
Лимонная кислота |
3391,90 |
3159,10 |
|
13. |
Ванилиновая кислота |
367,20 |
354,60 |
|
14. |
Феруловая кислота |
611,80 |
652,80 |
Как видно из таблицы 1, в исследуемых объектах наблюдалось достаточно высокое количество лимонной, яблочной и феруловой кислот.
Кроме того, в траве коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского следует отметить высокое содержание малоновой (455,90 мг/кг и 518,00 мг/кг), ванилиновой (367,20 мг/кг и 354,60 мг/кг), щавелевой (326,30 мг/кг и 305,20 мг/кг) и янтарной (301,80 мг/кг и 279,60 мг/кг) кислот соответственно. Следует отметить также, что в качественный состав органических кислот травы коровяка обыкновенного и коровяка джунгарского, заготовленных в Украине и Республике Казахстан идентичен.
Выводы.
- Методом газовой хроматографии в траве коровяка обыкновенного и траве коровяка джунгарского были идентифицированы органические кислоты, а также установлено их количественное содержание.
- В результате исследований было установлено наличие в траве изучаемых видов коровяка 14 органических кислот.
- Установлено, что высокое содержание лимонной, яблочной и феруловой кислот наблюдалось во всех исследуемых объектах.
- Результаты проведенных исследований могут быть использованы при создании новых фитосредств и их стандартизация.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
- Лекарственные растения: энцикл. / сост. И.Н. Путырский, В.Н. Прохоров. - 2-е изд. - М.: Книжный Дом, 2005.
- Определение органических кислот в сырье Tribulus terrestris L. / Б.М. Кливняк, Н.Е.Бурда, Я.В. Рожковский и др. // Фармация Казахстана. 2014. - № 6. - С. 31-34.
- Пастушенков, Л.В., Пастушенков, А.Л., Пастушенков, В.Л. Лекарственные растения: использование в народной медицине и быту. - Л. : Лениздат, 1990.
- Anti-inflammatory activities of new succinic and maleic derivatives from the fruiting body of Antrodia camphorata / S.-C. Chien, M.-L. Chen, H.-T. Kuo et al. // J. Agric. Food Chem. 2008. - Vol. 56, № 16. - Р. 7017-7022.
- Antioxidant properties of ferulic acid and its related compounds / H. Kikuzaki, M. Hisamoto, K. Hirose et al. // J Agric Food Chem. 2002. - Vol. 50(7). - P. 2161-2168.
- Fabad, J. Chemical Constituents of Verbascum L. Species / J. Fabad // Pharm. Sci. 2004. - Vol. 29. - P. 93-107.
- Hepatoprotective effect of syringic acid and vanillic acid on CCl4-induced liver injury / A. Itoh, K. Isoda, M. Kondoh et al. // Biol Pharm Bull. 2010. - Vol. 33(6). - P. 983-987.
- Inhibitory effect of oxalic acid on bacterial spoilage of raw chilled chicken / D.M. Anang, G. Rusul, S. Radu et al. // J. Food Prot. 2006. - Vol. 69, № 8. - Р. 1913-1919.
- Roman Merkl, Iveta Hrádková, Vladimir Filip and Jan Šтİđгкаİ. Antimicrobial and Antioxidant Properties of Phenolic Acids Alkyl Esters// Czech J. Food Sci. 2010. - Vol. 28, № 4. - P. 275-279.
- The Cardioprotective Effects of Citric Acid and L-Malic Acid on Myocardial Ischemia / Reperfusion Injury / Xilan Tang, Jianxun Liu, Wei Dong et al. // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2013. - Article ID 820695. - Р. 111.
- Triterpene saponins from Verbascum songaricum / K. Seifert, A. Preiss, S. Johne, J. Schmidt et al. // Phytochemistry. 1991. - Vol. 30 (10). - P. 3395-3400.