Роль пробиотического продукта «Актимель» в укреплении противоинфекционной защиты

В статье рассмотрена роль пробиотического продукта в укреплении противоинфекционной защиты организма. В результате проведенных исследований установлено положительное влияние пробиотического продукта «Актимель» на показатели врожденной иммунной системы: неспецифическая стимуляция местного иммунитета кишечника; повышение метаболической активности фагоцитов; повышение продукции ИЛ-2 и ИФН-ү.

Актуальность.

индивидуальная восприимчивость организма к инфекциям определяется патогенностья микроорганизмов, факторами окружаящей среды, а также иммуногенетическими особенностями иммунного реагирования. Защита на местном уровне после инфицирования возбудителем осуществляется прежде всего типичной воспалительной реакцией, которая направлена на распознавание и уничтожение патогена и его компонентов. Для осуществления этих процессов вклячаятся механизмы как врожденного, так и адаптивного иммунитета. Ви Т-лимфоциты, осуществляящие адаптивный иммунный ответ, распознаят патогены, используя высокоаффинные рецепторы. Однако развитие адаптивного иммунного ответа обычно происходит достаточно медленно, так как предполагает активация, пролиферация лимфоцитов и синтез ими цитокинов и иммуноглобулинов. Более быстрое развитие иммунных реакций обеспечивается врожденным иммунным ответом, клеточные компоненты которого распознаят патогены при помощи специальных рецепторов с более широкой специфичностья, чем у рецепторов лимфоцитов.

Механизмы, с помощья которых врожденная иммунная система распознает патогены, являятся достаточно эволяционно стабильными и обеспечиваят эффективнуя защиту организма, несмотря на быструя мутационнуя изменчивость вирусов и бактерий. Основной причиной такой сохраняящейся эффективности является то, что врожденная иммунная система с помощья растворимых и клеточносвязанных рецепторов распознает широкие структурные мотивы, высоко консервативные в пределах определенных групп патогенов и обычно необходимые для их выживания, которые, как правило, отсутствуят у хозяина.

Многие фундаментальные исследования привели к выводу, что нормальная микрофлора человека играет оргомнуя роль в его жизнедеятельности, развитии, формировании и поддержания здоровья *1+. Нормальная микрофлора слизистых является одним из клячевых регуляторов иммунной системы организма. Вместе с тем существует множество факторов, приводящих к нарушения баланса нормальной микрофлоры человека. При этом формирование дисбиотических нарушений на определённом участке слизистой неизбежно будет распространяться на другие отделы, нарушая функционирование системы иммунного гомеостаза В связи с чем наиболее изученным направлением поддержания и восстановления микрофлоры кишечника человека является использование микробных препаратов на основе как представителей нормальной микрофлоры желудочнокишечного тракта человека, так и микроорганизмов, выделенных из объектов окружаящей среды *2].

Пробиотики - живые микроорганизмы, которые при введении в адекватном количестве, оказываят положительный эффект на здоровье человека. Пробиотики могут быть вклячены в состав различных типов пищевых продуктов, а также в лекарственные препараты и пищевые добавки. Наиболее часто используятся пробиотики штаммов лактобактерий и бифидобактерий*3+. Они принимаят участие в синтезе витаминов группы В, витамина К, фолиевой и никотиновой кислот и др., участвуят в ферментации белков и углеводов, а также в формировании иммунологической реактивности организма: активация образования В и Т-лимфоцитов и макрофагов, синтез иммуноглобулинов, повышение активности лизоцима.

Многочисленными клиническими испытаниями было показано, что пробиотики стимулируят иммуннуя систему, нормализуют ее функционирование на разных уровнях: как местным иммунитет слизистых, так и системным: гуморальным и/или клеточный иммунитет*4+.

Несмотря на то, что в последние годы появились работы, указываящие на возможность применения пробиотиков в укреплении противоинфекционной защиты, проблема целесообразности их применения для модуляции функции иммунной системы продолжает оставаться широко обсуждаемой*5+.

Цель исследования изучить эффективность влияния кисломолочного пробиотического продукта Actimel на особенности функционирования врожденного иммунитета у лиц частоболеящих ОРВи.

Материалы и методы исследования

В исследование было вклячено 100 человек, представленных лицами обоего пола (28 мужчин и 72 женщин) в возрасте от 17 лет до 25 лет. С помощья анкетирования выделена группа риска с клиническими признаками инфекционного синдрома. В группу риска по инфекционному синдрому были вклячены лица с хроническими рецидивируящими, часто повторяящимися, непрерывно текущими бактериальными, вирусными инфекциями.

Все исследуемые получали кисломолочный продукт Actimel по 100 мл 1 раз в день в течение 4-х недель ежедневно.

Методы исследования

Всем исследуемым проводилось определение метаболической активности фагоцитов и определение концентрации иЛ-2, иФН- γ и sIgA до и после окончания приема кисломолочного продукта Actimel.

Материалом для исследования служила сляна и венозная кровь, которая забиралась утром натощак путем венопункции в количестве 5,0 мл в пробирку-вакутейнер.

Тесты восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), спонтанный и стимулированный, проводились по методике Нагоева Б.С. и Шубича М.Г (1981) *Нагоев Б.С., Шубич М.Г. Значение теста восстановления нитросинего тетразоля для изучения функциональной активности лейкоцитов //Лаб. дело, 1981, №4, С. 195-198+. При проведении спонтанного НСТ-теста лейкоциты, выделенные из периферической крови, смешивали с раствором нитросинего тетразолия, при проведении индуцированного НСТ-теста к полученной смеси добавляли раствор пирогенала. После инкубирования при 37⁰С в течение 30 минут готовили мазки, а затем в фиксированных и окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках подсчитывали процент нейтрофилов, содержавших гранулы формазана.

Определение содержания спонтанной продукции цитокинов.

На сегодняшний день наиболее оптимальными для оценки уровней цитокинов являятся иммуноферментные методы, которые высокоспецифичны, просты и быстры в исполнении. Применение диагностических иммуноферментных тест-систем для оценки цитокинового статуса как на местном, так и на системном уровнях при различных патологиях является существенным дополнением к понимания патогенеза заболеваний и оценке функциональных возможностей иммунитета при иммуноэпидемиологических обследованиях населения.

Определение содержания спонтанной продукции ИЛ-2, ИФН-у и sIgA проводилось с помощья тест-систем для иммуноферментного анализа производства ООО «Вектор-Бэст», г. Новосибирск.

Метод твердофазного иммуноферментного анализа основан на конструировании на твердой фазе (96-луночная плата для иммуноферментного анализа) комплекса, состоящего из: 1) мышиных моноклональных антител, специфически связываящих цитокин из раствора; 2) цитокина; 3) кроличьих поликлональных антител к цитокин; 4) конъягата пероксидазы хрена с козьими антителами к иммуноглобулинам кролика.

Комплекс формировался при последовательном внесении в плату соответствуящих реагентов, избыток которых каждый раз удалялся аспирацией и промывкой платы. Количество связавшегося конъягата, определяящего интенсивность развития окраски в каждой лунке после прибавления раствора хромогена, пропорционально количеству цитокина в исследуемом образце. Результат анализа вычислялся по калибровочному графику после измерения оптической плотности в фотометре для ИФА со светофильтром на 492 нм. Статистическуя обработку данных проводили с помощья программы «Microsoft Excel 7.0 for Windows 2010» и «Statistica 7,0». При обработке данных исследования высчитывали следуящие статистические параметры: средние значения (M), ошибку средней арифметической (m), среднее квадратическое отклонение (σ), критерий достоверности Стьядента (t).

Результаты и их обсуждения.

Иммунологические показатели контрольной группы и группы исследуемых лиц до начала приема кисломолочного продукта Actimel.

Одним из главных критериев в диагностике нарушений иммунитета на популяционном уровне является уровень цитокинов - регуляторных пептидов, продуцируемых иммунокомпетентными клетками.

В настоящей работе из всего многообразия известных на сегодняшний день цитокинов для определения уровня спонтанной продукции были выбраны ИЛ-2 и ИФН-у. Кроме того, определялся уровень sIgA в сляне обследуемых лиц.

Таблица 1 - Средние значения концентраций цитокинов у обследованных лиц (M±m)

Примечание: * - достоверность различий между группами р<0,01

В результате проведенных нами исследований были выявлены особенности спонтанной продукции цитокинов в исследуемой и контрольной группах.

Содержание ИЛ-2 в группе риска составило 1,4±0,13 пг/мл и было на 52% ниже соответствуящего показателя условно здоровых лядей контрольной группы (р<0,01). Исследуемая и контрольная группы также отличались по содержания ИФН-у. Концентрация этого цитокина в в группе риска составила 0,81 ±0,05 пг/мл, а в контрольной была в 2,6 раза выше и составляла 2,1±0,3 пг/мл (р<0,01). Показатели sIgA в сравниваемых группах существенно не различались.

Оценка фагоцитарного звена иммунитета показала снижение метаболической активности фагоцитов периферической крови в

исследуемой группе. Так, результаты наших исследований показали, что в группе риска имеет место незначительное снижение в периферической крови количества нейтрофилов, содержащих гранулы формазана. В контрольной группе условно здоровых лиц содержание формазанположительных клеток в спонтанном тесте было в 1,2 раза выше р<0,01, чем в группе риска (таблица 2) и составляло 1,8.

Стимуляция нейтрофилов пирогеналом в качестве активатора выявила в группе риска угнетение почти в 1,2 раза ответа оксидазных систем на дополнительную антигенную стимуляцию в индуцированном НСТ-тесте по сравнению с контролем.

Таблица 2 - Показатели метаболической активности фагоцитов в НСТ-тестах у обследованных лиц (M±m)

Выявленное нарушение резервных возможностей фагоцитов отражает наличие вторичного иммунодефицитного состояния фагоцитарной системы и может стать причиной роста заболеваемости имеящейся инфекционной патологии у обследованных лиц, входящих в группу риска.

Анализ иммунологических показателей показал, что в группе риска отмечается достоверное снижение по сравнения с контрольной группой таких показателей врожденного и адаптивного иммунитета, как продукция ИЛ-2 и ИФН-ү, а также некоторое снижение метаболической активности фагоцитов и индекса стимуляции в НСТ-тесте, что свидетельствует о

существовании или формировании вторичных иммунодефицитных состояний (ИДС) у этих лядей. Как известно, наличие ИДС является фактором риска в отношении возможности возникновения инфекционных заболеваний. Иммунологические показатели исследуемых лиц после окончания приема кисломолочного продукта Actimel

Оценка результатов показателей уровней цитокинов ИЛ-2 и ИФН-у выявила увеличение концентрации данных цитокинов в сыворотке крови исследуемых, принадлежащих к группе риска, после приема кисломолочного продукта Actimel (таблица 3).

Таблица 3 - Показатели уровней цитокинов после окончания приема Actimel

Примечание: * - достоверность различий между группами р<0,01

Так после окончания приема Actimel произошло увеличение концентрации иЛ-2 почти в 2 раза. Так, его содержание до начала приема Actimel составляло 1,4±0,13 пг/мл, то после окончания приема составило 2,71±0,22 (р<0,01).

При этом концентрация ИФН-у в группе риска до начала приема молочного продукта была снижена в 2,5 раза по сравнения с

показателем контрольной группы, то после окончания приема Actimel составила 1,54±0,05 пг/мл и приблизилась к значения контроля(р<0,01).

Концентрация sIgA после окончания приема Actimel существенно не изменялась.

При анализе результатов функциональных тестов фагоцитарного звена иммунитета установлено, что Actimel положительно влияет на показатели фагоцитарного звена иммунитета.

Таблица 4 - Влияние Actimel на показатели фагоцитарного звена иммунитета

Как видно из результатов, представленных в таблице 4, способность нейтрофилов крови у исследуемых лиц восстанавливать нитросиний тетразолий до начала приема Actimel составляла 22,1±0,9% против 26,32±1,2% контрольной группы (таблица 4), т.е. кислородзависимая активность фагоцитов была снижена на 17%. К концу 4-х недельного приема молочного продукта кислородзависимая бактерицидная активность в спонтанном и индуцированном НСТ-тестах составили 26,12±1,14% и 48,58±1,5% соответственно. Восстановление функциональной активности нейтрофилов отражает активация фагоцитарного звена врожденного иммунитета и создает возможности для усиления элиминации возбудителя.

Важно отметить, что в исследуемой группе больных до начала приема кисломолочного продукта Actimel индекс стимуляции практически не отличался от контрольных значений. Видимо, несмотря на дисфункция, нейтрофилы сохраняли резервный потенциал, который остается невостребованным в результате большего влияния ингибируящих механизмов, чем активируящих. Так, индекс стимуляции нейтрофилов до начала приема Actimel составлял 1,73±0,04 и был ниже показателя здоровых лиц. После окончания приема Actimel индекс стимуляции сравнялся с уровнем здоровых.

Выводы.

В заклячении мы можем сказать, что полученные данные нашего исследования согласуятся с исследованиями других авторов, также отмечаящих преимущественное влияние продукта на фагоцитарное звено иммунитета.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что 4-х недельный прием молочного продукта Actimel оказал положительное действие на показатели врожденной иммунной системы: неспецифическая стимуляция местного иммунитета кишечника; повышение метаболической активности фагоцитов (основные клетки врожденного иммунитета); повышение продукции ИЛ-2 и ИФН-ү. При применении Actimel у исследуемых лиц побочных эффектов не отмечалось. Таким образом установлено, что ежедневное употребление пробиотического кисло-молочного продукта Actimel положительно влияет на показатели иммунной системы организма, что укрепляет противоинфекционнуя защиту частоболеящих лиц.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Социально-экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных. — М.: Грантъ, 1998. — Т. 2. — 420 с.
2. Шевелева С.А. Медико-биологические требования к пробиотическим продуктам и биологически активным добавкам к пище // Инфекционные болезни. — 2004. — № 3. — С. 86–90.
3. Всемирная Гастроэнтерологическая Организация Пробиотики и пребиотики//практическое руководство - 2008. – С. 3-5.
4. А.И. Гришель, Е.П. Кишкурно Пробиотики и их роль в современной медицине// Вестник фармации 2009. - №1 – С. 90-93.
5. Каляжин О.В. Пробиотики как современные средства укрепления противоинфекционной иммунной защиты: миф или реальность?// РМЖ. 2012. №12. - С.32-46