Фенотипическая изменчивость урогинекологических штаммов c.albicans

Проводилась оценка биологических свойств грибов Candida spp. и уровня чувствительности уроги- некологических изолятов к антифунгальным препаратам. Изучение микробного состава мазков из влагалища и мочи показало доминирующую роль C.albicans - 95,7%, а также выделялись и неалбикансные виды в 4,2% (C.glablara 2,9%, C.krusei – 1,4%). В 18,8% случаях отмечался рост сухих, восковидных, морщинистых колонии, отчасти врастающих в агар R-форм. Урогинекологические штаммы грибов C.albicans, проявляли в 69,1% наибольшую зону ингибиции к нистатину 21-24мм, а к амфотерицину 7,6%-23мм.

Актуальность. Эволюция микробиоценоза, формирующегося в постоянном столкновении возбудителя с защитными механизмами организма хозяина, определяет спектр известных механизмов бактерийного выживания в условиях инфицированного организма [1]. В настоящее время урогенитальный кандидоз является одним из наиболее распространенных заболеваний мочеполовой системы. Частота выделения грибов в популяции женщин по данным ретроспективного анализа увеличилась с 3-4% до 17-29% в настоящее время [2]. Настораживает уровень инфицированности населения патогенными грибами в различных регионах Европы составляет 20-70%, в среднем по России – около 40%. Зарубежные исследования показали, что примерно 75% женщин в течение жизни отмечают у себя, по меньшей мере, один эпизод урогенитального кандидоза и 40% из них заболевание рецидивирует, оказывая неблагоприятное действие не только на состояние, но и на качество жизни в целом [3]. Актуальным на сегодняшний день остается стремление исследователей унифицировать алгоритмы обследования больных с заболеваниями мочевыделительной системы, специфичных для конкретных состояний пациента [4]Доминирующая роль в диагностике кандидозного вульвовагинита принадлежит микробиологическим методам исследования, диагностическая ценность которых достигает 95% [5]. Грибы имеют определенные особенности, которые способствуют развитию у них лекарственной устойчивости не столь частым явлением как у бактерий [2]. По сведениям литературы за последние 10 лет отмечается снижение чувствительности клинических изолятов дрожжей к азолам и повышение чувствительности к группе полиеновых антимикотики [6]. Наиболее часто используемыми группами современных противогрибковых препаратов для лечения дрожжевых инфекции гениталий являются азолы и полиены [7], в частности флюконазол, интраканазол, нистатин, амфотерицин. Качественные материалы, точное выполнение всех лабораторных процедур и совершенствование навыков клинической интерпретации результатов тестирования обеспечат успешность анализа полученных данных о чувствительности микроорганизмов. Адекватная антибактериальная терапия, применяемая в отношении пациентов с инфекционными заболеваниями основывается на соблюдении принципов подбора антимикотических дисков для постановки ДДМ. Некачественно выполненное микробиологическое исследование ведет не только к необоснованным материальным затратам, но и самое главное – к нерациональному назначению антибиотиков клиницистами, ухудшению исхода болезней, увеличению длительности госпитального лечения и стоимости лечения [8].

Целью исследования являлась оценка биологических свойств дрожжеподобных грибов Candida spp. и уровня чувствительности урогинекологических изолятов к антифунгальным препаратам.

Материалы и методы. Обследовано 77 образцов (урогинекологический материал) от больных с неэпидемическими инфекционными заболеваниями со следующими нозологическими формами: вагинозы, кольпит, сальпингоофорит, пиелонефрит. Контингент обследованных представлен в основном пациентами, находящимися в инфекционной больнице ГККП им. И.Жекеновой г. Алматы, а также амбулаторные пациенты г.Алматы. Среди обследованных 79,2% составляли беременные. Возраст пациентов варьировал от 18 до 58. В отношении искусственного культивирования дрожжеподобных грибов рода Candida spp. нами применялись среды выделения: селективные по составу и неселективные. В частности, изучались биологические особенности грибов на достаточно широком перечне питательных сред: Сабуро производство «Франция» Sabouroud Pextroze Broth МбС006, Агар Сабуро с глюкозой Sabouraud Dextrose AgarM063, Хромогенный агар для грибов Candida, модифицированный (HiCrome Candida Differential Agar Base, Modified) М1456А, Основа агара D.T.M. (Агар для дерматофитов) М188. В дальнейшую работу были взяты 69 урогинекологических культур грибов, идентификацию до вида которых проводили по общепринятой схеме: изучение биохимического «поведения» клинических изолятов, образования бластоконидий и хламидиоспор, псевдомицелия на кукурузном агаре (Corn Meal Agar) М146 и ростовых трубок на лошадиной сыворотке RM1239.

Уровень чувствительности клинических изолятов к наиболее часто применяемым в практике анти- микотикам определяли дискодиффузным методом (ДДМ). Были использованы следующие диски с анти- микотиками: флюканазол (fu10), кетакеназол (ke10), интраканазол (it10), нистатин (ns100), клортримазол (cc10), амфотерацин (ap1000) (производства фирмы HiMedia).

Результаты и обсуждение: Изучение микробного состава мазков из влагалища и мочи обследованных пациентов показало доминирующую роль, из числа потенциально патогенных грибов рода Candida, C.albicans - 95,7%. Наряду с ней выделялись и неалбикансные виды в 4,2%, в частности C.glablara 2,9%, C.krusei – 1,4% представленные в диаграмме №1.

Видовой состав дрожжеподобных грибов Candida śрр. при исследовании мочи и влагалищных мазков.

Диаграмма №1.

По результатам оценки культуральных свойств на селективной плотной среде Сабуро (фирмы HiMedia), предназначенной для культивирования дрожжеподобных и плесневых грибов идентифицированный вид C.albicans через 72-120 часов учитывался нами на основании следующей характеристики колоний: гладкие, выпуклые, кремовато-белого цвета, мягкой консистенции. Наряду с «классическим» описанием в отдельных случаях, составивших 13(18,8%) случаев отмечался рост сухих, восковидных, морщинистых колонии, отчасти врастающих в агар, однако высокая степень их обсемененности требовала продолжения верификации этих клинических изолятов. В этой связи нами для восстановления выявленной культуральной атипичности колоний применялся бульон Сабуром с 2% содержанием глюкозы при температурном режиме 220С в течение 48 часов.

По полученным результатам оценки антимикотической активности урогинекологических штаммов нас интересовала чувствительность C.albicans. Применяемая нами методика определения антимикотической активности являлась стандартной и соответственно позволяет оценивать результаты по единому критерию ингибиции роста (т.е. диаметру задержки, предложенному производителем). Изучение активности урогинекологических штаммов C.albicans в отношении нистатина, показали чувствительность в 68 случаях - 98,6%. Мальбахова Е.Т. с соавторами (2008, РФ) изучая этиологическую структуру вульвовагинального кандидоза, видовое разнообразие и чувствительность к противогрибковым препаратам, отмечала повышение чувствительности к полиеновым антимикотикам. Такой характер изменений чувствительности скорее всего обусловлен с фунгицидным механизмом действия, связанный с нарушением целостности клеточной стенки [6].

Далее нами проанализировали более детально зоны ингибиции урогинекологических изолятов в отношении полиеновых антимикотиков, в т.ч. нистатину. Урогинекологические штаммы дрожжеподобных грибов C.albicans, составили 69,1% с зоной ингибиции к нистатину с диаметром 21-24мм, при том что наименьшее значение составляли 18мм по сравнению с диапазоном зон ингибиции от 15-23мм, указанным в сопроводительном сертификате спецификации дисков с нистатином Himedia (NS 100ЕД SD025). Известно, что химическая структура лекарственного средства является наиболее удобным принципом классификации, так как строение вещества определяет механизм действия. Противогрибковые препараты могут обладать фунгицидным (приводящий к гибели клетки) или фунгистатическим (останавливается образование и рост новых грибов) действием [9]. В свою очередь и микроорганизмы способны приобретать, находясь в относительно благоприятной среде, различные новые свойства как результат противостояния иммунобиологической реакции организма пациента. Интерес представляют полученные нами данные по чувствительности 66,2% урогинекологических штаммов к амфотерицину, группе полиеновых антимикотиков. Установлено, что составляла задержка роста к амфотерицину штаммов C.albicans отмечалась наибольшего диаметра 23мм (7,6%) и наименьшего 15мм(3%), при рекомендации производителя учитывать диапазон: хронические заболевания. проблемы. решения зон ингибиции от 10мм-18мм. По сведениям литературы, выбранные нами в работе полиеновые препараты (нистатин) взаимодействуют с эргостеролом мембраны либо, образуют поры (в случае крупной молекулы нистатина), что приводит к гибели гриба вследствие осмотического шока, либо, ингибируя мембранные функции, включая ионообмен и пиноцитоз за счет образования необратимых связей с эргостеролом (в случае с меньшей по размеру молекулой натамицена), что влечет за собой гибель гриба вследствие дис- метаболических нарушений [7]. В этой связи не исключается вероятность, что изученные нами урогинеко- логические штаммы C.albicans приобрели свои характерные фенотипические особенности, которые, появились в процессе длительного вегетирования находясь, в организме пациентов (в латентном состоянии); они сумели не только адаптироваться, но представлять «угрозу» организму пациента в другом качестве.

Анализируя антибиотикограммы 69 урогинекологических штаммов целесообразным на наш взгляд, является отметить, что в 98,6% нами зарегистрирована полирезистентность у этих штаммов. Данное свойство, безусловно, следует отнести к фенотипической изменчивости клинических изолятов, приобретенных in vivo. В публикациях Анкирской А.С. (2009г) была изучена частота устойчивости культур грибов C.albicans, которая имела тенденцию к снижению.

Суммируя полученные результаты комплексной оценки обнаруженной фенотипической изменчивости «диких» урогинекологических штаммов демонстрировали на первичном посеве: не типичное «поведение» по культуральным свойствам в 18,8%, т.е. выделялись в R-форме, а также в 1,4% не характерную ферментативную активность. Установлена наибольшая чувствительность урогинекологических штаммов к амфотерицину в 66,2%, а к нистатину - 69,1%, что можно трактовать как феномен адаптации in vivo в организме пациента, который в современных условиях лечения достаточно часто и широко самостоятельно использовал антимикотические препараты при выявлении соматических заболеваний.

 

список литературы

  1. Авдиенко И.В., Коршунов Г.В. Пути повышения медико-экономической эффективности лабораторной службы. // Ж. Клин. Лаб. диагностика. – 2000. – № 9. – С. 35.
  2. Анкирская А.С., Муравьева В.В. и др. Генитальный кандидоз в структуре оппортунистических инфекций влагалища, принципы лабораторной диагностики и значение мониторинга чувствительности грибов к антимикотикам. Акушерство и гинекология 2009 №5.-С.32-35.
  3. Байрамова Г.В.Хронический рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз: принципы диагностики и возможности терапии. Акушерство и гинекология 2008 №6.-С.64-66.
  4. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. // М., Медицина. – 1999 – 245с.; Deretic V. In: Persistent Bacterial Infections. // Washington, ASM press. – 2000. – P. 305-326.; Бухарин О.В. Проблемы персистенции патогенов в инфектологии // Ж. Микробиол. – 2006. – № 4. – С. 4-8
  5. Валиева С.А. Оценка эффективности и безопасности применения орунгала при лечении урогенитального кандидоза Астана мед.журналы №2.- 2008. – С.44-45.
  6. Мальбахова Е.Т., Аргумян В.Г. и др. Вульвовагинальный кандидоз: видовое разнообразие и чувствительность к противогрибковым препаратам. Акушерство и гинекология 2008 №- С.44-46.
  7. Особенности определения чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом Решедько ГК., Cтецюк О.У. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия Том 3, N 4, 2001 стр. 348-354
  8. Тихомиров А.Л., Олейник Ч.Г. - Современное лечение кандидозного вульвовагинита. - http:// medi.ru/DOC/180101.htm.
  9. reproduct-endo.com.ua/ginekologia/365.

резюме

 

Год: 2013
Город: Алматы
Категория: Медицина