Базидиомицеты (от греч. Basidon - маленькая основа, mykes - гриб) с научной точки зрения – это высшие грибы с многоклеточным мицелием двух различных типов: первичным - гаплоидным (содержащим половинчатый набор хромосом), достаточно слаборазвитым; вторичным - диплоидным (с полным набором хромосом).
Если оценить значение отдела базидиомицетов в жизни человека и природе, то следует отметить следующие аспекты: грибы-сапрофиты – очень успешно минерализуют растительные остатки, и участвуют в круговороте веществ в природе; грибы-симбионты (микоризообразователи) – улучшают рост и способствуют развитию высших растений; грибы-паразиты – причиняют вред культурным растениям и наносят убытки сельскому хозяйству.
Большинство плодовых тел базидиальных грибов с успехом культивируют в промышленных масштабах для использования в пищу человеком. Для биотехнологии базидиомицеты представляют собой важную роль, так как являются источниками статинов. Статины – это класс препаратов, которые уменьшают выработку холестерина, благодаря чему снижают его уровень в крови. Также они блокируют работу фермента, участвующего в синтезе холестерина. Научное название статинов – ингибиторы ГМГ- КоА-редуктазы (3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим А-редуктазы) [3].
При глубинном культивировании биомассы гриба рода P.ostreatus содержание веществ составляет: протеинов – (35 - 40)% , белков – (20 - 30)%, углеводов – (45 - 55)%, липидов – (4 - 6)%, нуклеиновых кислот - 3%.
Грибную биомассу (мицелий вешенки P.ostreatus) можно использовать также в качестве посевного материала в грибоводстве при выращивании плодовых тел.
Итак, выращивание мицелия P.ostreatus в глубинной культуре позволяет получить экологически чистую грибную биомассу и препарат фермента монофенолы-монооксигеназы [5].
Цель исследования. Освоить методы выделения мицелия из плодовых тел гриба P.ostreatus; подобрать соответствующие питательные среды для мицелия P.ostreatus с целью оптимального накопления биомассы и сравнить линейный рост мицелия на различных питательных средах.
Все испытания с выделением чистого штамма и накоплением биомассы проводились в лабораторных условиях на базе кафедры биотехнологии Национального фармацевтического университета.
Мицелий гриба - это вегетативная ткань плодового тела гриба, которая имеет характерный вкус и запах соответствующего гриба. Получение мицелия вешенки P.ostreatus возможно как в поверхностной, так и в глубинной культуре. При глубинном выращивании съедобных грибов обычно преследуется цель получения штаммов, характеризующихся интенсивным ростом мицелия с высоким содержанием белка. Поэтому выращивание мицелия базидиальных грибов, в том числе мицелия вешенки P.ostreatus, в глубинной культуре рассматривается в качестве одного из возможных путей получения пищевого и кормового белка [6].
В данной работе объектом был выбран дереворазрушающий гриб вида P.ostreatus.
В ходе проведения экспериментов применяли микроскопические методы исследований и определенные лабораторные процедуры.
Для исследования был использован биологический материал гриба вида P.ostreatus для приготовления препарата раздавленная капля, который изучался под световым микроскопом, применяя общепринятые культурально-морфологические методики, разработанные для исследования в чистой культуре высших базидиальных грибов. Также на различных лабораторных средах исследовалась морфология колоний и микроструктур вегетативного мицелия с помощью светового микроскопа [1].
Для изучения параметров роста изолята P.ostreatus использовали 4 питательные среды – картофельно-глюкозный агар, среда Чапека, среда для дереворазрушающих грибов, среда Сабуро коммерческого изготовления.
Плотные питательные субстраты традиционного состава изготавливали по методикам, изложенным в научной литературе и согласно инструкции производителя. Для предотвращения бактериальной контаминации культур трех начальных пассажей в среду добавляли антибиотик гентамицин в концентрации 100 мкг / см3 [4].
Для выполнения первого этапа исследований в лабораторных условиях были проведены очистка и выделение мицелия с плодового тела гриба P.ostreatus. На втором этапе работы для изучения биологических особенностей использовали изолят P.ostreatus, полученный на первом этапе работы. Следующей стадией было заражение четырех подготовленных образцов плотных питательных сред.
Изучение интенсивности роста мицелия изолята P.ostreatus на питательных средах различного состава проводили по показателям линейного роста. Во время поверхностного культивирования изолята проводили ежесуточные измерения линейных размеров зон радиального роста мицелия [2].
Исходя из результатов, пришли к заключению, что для первичной изоляции мицелия P.ostreatus эффективнее использовать картофельно-глюкозный агар, чем остальные 3 среды (среда Чапека, агар для дереворазрушающих грибов, среда Сабуро).
Скорость роста мицелия P.ostreatus на картофельно-глюкозном агаре на уровне 3 пассажей составляет (56,67 ± 5,00) мм / 5 суток, что в 1,4 раза превышает скорость роста на среде Сабуро.
При использовании антибиотика гентамицина в концентрации 100 мкг/см3, добавленного в питательные среды, не была замечена бактериальная контаминация.
Выводы. В ходе проведения экспериментов, установлена зависимость скорости роста мицелия P.ostreatus от состава исследуемых питательных сред. Данные, полученные в эксперименте, подтверждают эффективность использования (в 1,4 раза) картофельно-глюкозного агара для первичной изоляции мицелия P.ostreatus при температуре культивирования 26 °С.
Список литературы
- Бондарцева М.А. Определитель грибов России. Порядок афиллофоровые М.А. Бондарцева.– Вып. 2. - СПб.: Наука, 1998. – С. 224 – 229
- Билай В.И. Методы экспериментальной микологии / В.И. Билай. - К.: Наукова думка, 2004. - 552 c
- Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов [Текст]/В. Рипачек. – М.: Лесная промышленность, 2011. – 276 с.
- Семенов С.М. Лабораторные среды для актиномицетов и грибов/С.М.Семенов. – М.: Агропромиздат, 2004. – 240 с.
- Grinkevich N. I. Chemical analysis of herbs / N. I. Grinkevich, L. N. Safronich. - M: The higher school, 2009. - 176 P.
- Olennikov D. N. Modification of anthrone method of quantitative definition of carbohydrates and its application for the analysis of the vegetable raw materials containing Polysaccharides / N. D. Olennikov, L. M. Tankhayev // Bulletin sib. medicine. - 2006.- Enc. 2. - P. 118-119.