Исследование биологически активных веществ и экстрактов листьев ежевики бесшипной

АННОТАЦИЯ

В статье представлены результаты исследования химического состава, цитотоксических свойств, а также ИК-спектр спиртового экстракта листьев ежевики бесшипной.

Ключевые слова: биологически активные вещества, ежевика, химический состав, реакция, дубильные веществ, аминокислоты.

Ежевика - кустарник с многолетними корневищами и двулетними надземными побегами, относящийся к семейству Розоцветные. Цветет ежевика в июне-июле, плодоносит в августе- сентябре [1]. Ранние исследования доказали, что ягоды ежевики препятствуют возникновению различных новообразований и приостанавливают развитие раковых опухлей. В связи с чем, мы решили произвести исследования на аналогичные свойства листьев ежевики.

Объект исследования. Сырье для исследований было собрано в Ордабасинском районе, с. Шубарсу ЮКО в сентябре 2014 года. Ежевика - подрод рода Рубус (Rubus) семейства Розоцветные (Rosaceae).

Цель исследования: исследование биологически активных веществ и экстрактов листьев ежевики бесшипной.

Методика проведения качественного анализа

По литературным данным листья ежевики богаты дубильными веществами (до 20%) и аминокислотами. Мы провели ряд качественных реакций для подтверждения наличия данных биологически активных веществ в листьях ежевики бесшипной [2].

Сначала около 1г измельченного растительного сырья заливают 100 мл воды очищенной, нагревают на водяной бане в течение 30 мин, фильтруют. Для проведения качественных реакций используют 1-3 мл полученного извлечения.

Для того чтобы отличить типы дубильных молекул, мы проделали следующие качественные реакции:

1. К 1-3 мл полученного извлечения добавили капли 1% раствора квасцов железоаммониевых, в результате появилось черно-синее окрашивание, что свидетельствует о наличии в листьях ежевики гидролизуемых дубильных веществ.
2. К 1-3 мл полученного извлечения добавили 2мл 10% кислоты уксусной и 1 мл 10% раствора средней соли свинца ацетата, появился осадок, что также свидетельствует о наличии гидролизуемых дубильных веществ.
3. К 1-3 мл полученного извлечения добавили несколько кристаллов натрия нитрата и 2 капли 0,1н раствора кислоты хлороводородной, появилось небольшое желто-коричневое окрашивание, что доказывает наличие гидролизуемых дубильных веществ.
4. К 1-3 мл полученного извлечения добавили несколько капель 1% раствора ванилина в кислоте хлороводородной концентрированной, раствор окраску не поменял. Это доказывает отсутствие в листьях ежевики конденсированных дубильных веществ.
5. К 1-3 мл полученного извлечения добавили по каплям 1% раствор желатина, появилась муть; при прибавлении избытка желатина муть исчезла. Это доказывает наличие в листьях ежевики дубильных веществ.

Аминокислоты присутствуют во всех органах всех растений. Для качественного обнаружения многообразия аминокислот нет строго специфичной реакции. Мы провели несколько качественных реакций, доказавших наличие аминокислот в листьях ежевики.

Измельченное растительное сырье заливают спиртом этиловым 50%, нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, фильтруют. Для анализа мы использовали 1-3 мл извлечения.

1. При добавлении 1-2 мл раствора натрия нитрита в кислоте соляной к 1-3 мл извлечения мы наблюдали появление бледно-желтого окрашивания с выделением паров азота, что доказывает наличие аминокислот в листьях ежевики.
2. К 1-3 мл извлечения добавили 1-2 мг резорцина и 5 капель кислоты серной концентрированной, нагрели до появления зелено-коричневого окрашивания. Затем добавили 5 мл воды и 5 мл раствора аммиака, в результате чего появился бледно-красный оттенок, что также подтверждает наличие аминокислот, причем ароматических.
3. Биуретовая реакция. К 1-3 мл извлечения добавили 1-2 мл раствора натра едкого концентрированного и 1 мл раствора меди сульфата, в результате чего появилась синяя окраска с переходом в темно-зеленую. Это доказывает наличие белков, пептидов, белковых комплексов.
4. Ксантопротеиновая реакция. К 1-3 мл извлечения добавили 1 мл кислоты азотной концентрированной, в результате чего появилась муть, а после нагревания данного раствора появился белый осадок. Эта реакция также свидетельствует о наличии ароматических аминокислот [3].

Исследование цитотоксических свойств

Воздушно-сухое и измельчённое растительное сырье было экстрагировано этиловым спиртом. Полученный экстракт отгоняли на роторном испарителе и получили спиртовый экстракт.

Проведено также исследование цитотоксических свойств спиртового экстракта надземной части Ежевики Бесшипной. Цитотоксические свойства исследованы на опухолевых клетках человека HeLa. Результаты исследования показаны в нижеследующем графике. Как видно из графика снижения роста опухолевых клеток при введении спиртового экстракта надземной части ежевики бесшипной не наблюдается.

Поглощение в области 3000 см^-1, 1600 см^-1, 1500 см^-1, 900-700 см^-1 свидетельствует о наличии в экстракте соединений с ароматической функцией. В спектре имеются полосы поглощения, относящиеся к соединениям с эфирной связью 1300 см^-1. Поглощение в области 12001400 см^-1 вызваны наличием карбоновых кислот. О присутствии соединений с сложноэфирной связью говорит полоса поглощения при 1735-1750 см-1. Широкая полоса поглощения в области 3000-3600 см-1 говорит о наличии соединений с гидроксильной группой.

Результаты исследования:

1. В листьях ежевики, с помощью качественных реакций, определены гидролизуемые дубильные вещества, ароматические аминокислоты и другие белковые комплексы.
2. Спиртовый экстракт данного растения не обладает цитотоксичностью на линию опухолевых клеток HeLa.
3. При ИК спектроскопии в экстракте обнаружены соединения с ароматической функцией, с эфирной связью, сложноэфирной связью и гидроксильной группой, а также карбоновые кислоты.

Таким образом, результаты данного исследования доказывают актуальность дальнейшего фармакогностического и фитохимического изучения листьев ежевики, как перспективного источника биологически активных веществ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Патсаев А.К., Махатов Б.К., Патсаева К.К., Токсанбаева Ж.С. Фармакогностическое и фитохимическое изучение ежевики бесшипной //Вестник ЮКГФА. Материалы научнопрактической конференции «Фармацевтическое образование, наука и производство- ориентир на стратегию «Казахстан 2020». 23-24 октября 2014 г. - Шымкент, 2014. -IV том - С.88-91.
2. Патсаева К.К., Токсанбаева Ж.С., Серикбаева Т.С. Макроскопический анализ ежевики бесшипной // Республиканская научно-практическая конференция (с международным участием) «Интеграция образование, науки и производства в Фармации» 10-11 ноября 2014 года. Ташкент, Республика Узбекистан. -I том.- С.61-62.
3. Музычкина Р.А., Корулькин Д.Ю., Абилов Ж.А. Качественный и количественный анализ основных групп БАВ в лекарственном растительном сырье и фитопрепаратах.-Алматы.- «Қазақ университеті». - 2004.