АННОТАЦИЯ
В данной статье приведены результаты исследования антимикробной активности и микробиологической чистоты экстрактов чертополоха курчавого. Было установлено, что экстракт чертополоха курчавый. 40% проявляет антимикробную активность по отношению ко всем бактериальным культурам: грамположительным Staphylococcus aureus - 20-21 мм, Bacillus subtilis - 16-17 мм, а также к грамотрицательной Escherichia coli - 18-19 мм. Экстракт чертополоха курчавый. 90% проявляет антимикробную активность так же по отношению ко всем бактериальным культурам: грамположительным Staphylococcus aureus - 22-23 мм, Bacillus subtilis - 19-20 мм, а также к грамотрицательной Escherichia coli - 21-22 мм. По отношению к дрожжеподобной культуре гриба рода Candida albicans активности не наблюдали.
Ключевые слова: экстракт, чертополох курчавый, антимикробная активность, микробиологическая чистота.
Введение. Развитие фармацевтической промышленности в Республике Казахстан целесообразно и экономически выгодно осуществлять посредством развития фитохимических производств, что обусловлено наличием в республике уникальной сырьевой базы лекарственных растений, значительным научно-техническим потенциалом в области химии, медицины и фармации, накопленным в республике, и традиционной направленностью отечественных производителей субстанций лекарственных препаратов на переработку лекарственного растительного сырья. При этом одним из основных приоритетов развития отечественной фармацевтической промышленности является разработка и внедрение в производство оригинальных отечественных субстанций на основе лекарственного растительного сырья и на их основе лекарственных препаратов.
Чертополох курчавый произростает в Южных районах Республики Казахстан и его сырьевые запасы оцениваются в тысячи тонн в год. Поэтому внедрение этого вида сырья в фармацевтическую технологию является перспективным и отвечает современным задачам фармацевтической промышленности Республики Казахстан.
Нами были получены 40% и 90% спиртовые экстаракты чертополоха курчавого, которые исследовали на антимикробную активность и микробиологческую чистоту.
Объекты и методы исследования. Исследования антимикробной активности экстрактов проводили на кафедре биотехнологии Национального фармацевтического университета. Для анализа получены образцы экстрактов (кафедра промышленной фармации НФаУ): №1. Экстракт чертополоха куч. 40%; №2. Экстракт чертополоха куч. 90%.
Противомикробную активность образцов экстрактов изучали in vitro методом диффузии в агар (метод «колодцев»), который основан на способности активнодействующих веществ диффундировать в агар, засеянный предварительно культурами микроорганизмов. Все исследования проводили в строгих асептических условиях, с использованием ламинарного бокса (кабинет биологической безопасности АС2-4Е1 «Esco», Индонезия).
В качестве тест-культур использовали микроорганизмы из Американской коллекции типовых культур (АТСС - American Type Culture Collection): грамположительные бактерии Staphylococcus aureus АТСС 25293, споровую культуру Bacillus subtilis АТСС 6633, грамотрицательную культуру Escherichia coli АТСС 25922. Антифунгальную активность определяли по отношению к дрожжеподобному грибу рода кандида - Candida albicans АТСС 885653.
Показателем противомикробной активности является размер зоны задержки роста тест- микроорганизмов, которая образуется в агаризованой питательной среде на чашках Петри. Диаметр зон задержки роста с учетом диаметра лунки измеряли с точностью до 1 мм, при этом ориентировались на полное отсутствие видимого роста.
При проведении исследований использовали суточные суспензии бактериальных микроорганизмов в физиологическом растворе, и двухсуточную культуру дрожжеподобного гриба. Микробная нагрузка составляла 1х107 колониеобразующих единиц микроорганизмов в 1 мл питательной среды (КОЕ/мл).
В чашки Петри, установленные на горизонтальной плоскости вносили по 10 мл незараженного «голодного» агара АГВ (для верхнего слоя при работе с бактериальными культурами используем мясо-пептонный агар (МПА), при работе с дрожжеподобным грибом - агар Сабуро), после застывания данного слоя агара на его поверхность на равном расстоянии друг от друга и от края чашки помещали стерильные стальные цилиндры (высота 10,0±0,1 мм, наружный диаметр 8,0±0,1 мм) и заливали верхний слой растопленным и охлаждённым до 45-48 °С агаром с культурами микроорганизмов в количестве 15 мл (13,5 мл растопленного агара и 1,5 мл микробной взвеси микроорганизма с нагрузкой 1х107 КОЕ/мл). После охлаждения и застывания верхнего слоя питательной среды цилиндры вынимали стерильным пинцетом и в образовавшиеся лунки вносили исследуемые образцы экстрактов (0,25-0,3 мл) до полного их заполнения. Параллельно проводили исследование с растворителями образцов №1 и №2 - спиртом этиловым 40% и 90% соответственно. Чашки Петри с посевами помещали в термостат - бактериальные культуры при температуре 32,5±2,5 °С на 18-24 години, культуру дрожжеподобного гриба при 22,5±2,5 °С на 48 годин. Диаметры зоны подавления роста
микроорганизмов характеризуют антимикробную активность исследуемых образцов.
Результаты и обсуждение. Диаметр зоны задержки роста микроорганизмов
характеризует антимикробную активность экспериментальных образцов следующим образом:
- отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов около лунки, а также зона задержки роста диаметром до 10 мм, оценивали как не чувствительность микроорганизмов к образцам экстрактов, внесенных в лунки;
- зона задержки роста диаметром 11-15 мм оценивали как слабую чувствительность культуры к действующим веществам исследуемых образцов экстрактов;
- зона задержки роста диаметром 15-25 мм - чувствительный штамм к исследуемым образцам;
- зона задержки роста, диаметр которой превышает 25 мм, свидетельствовал о высокой чувствительности микроорганизмов к исследуемым образцам экстрактов.
В результате проведених исследований по изучению антимикробной активности образцов экстрактов в отношении разных культур микроорганизмов были получены следующие результаты представленные в таблице
|
Образец |
Культуры микроорганизмов |
|||
|---|---|---|---|---|
|
S.aureus |
B. subtilis |
E. coli |
C. albicans |
|
|
Диаметри зони задержки росту микроорганизмов, мм |
||||
|
Контроль (спирт етиловий 40%) |
- |
- |
- |
- |
|
Контроль (спирт етиловий 90%) |
- |
- |
- |
- |
|
№1 Экстракт чертопол. куч. 40% |
20-21 |
16-17 |
18-19 |
- |
|
№2 Экстракт чертопол. куч. 90% |
22-23 |
19-20 |
21-22 |
- |
Таблица 1- Антимикробная активность исследуемых образцов экстрактов
“ - “ - отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов.
Данные, полученные экспериментально и представленные в таблице 1, показали, что Контроль (спирт етиловий 40%) и Контроль (спирт этиловый 90%) не обладают антимикробной активностью по отношению ко всем используемым микроорганизмам - зон задержки роста тест- культур не наблюдали.
Образец №1 (Экстракт чертополоха куч. 40%) проявляет антимикробную активность по отношению ко всем бактериальным культурам: грамположительным Staphylococcus aureus - 2021 мм, Bacillus subtilis - 16-17 мм, а также к грамотрицательной Escherichia coli - 18-19 мм. По отношению к дрожжеподобной культуре гриба рода Кандида Candida albicans активности не наблюдали.
Образец №2 (Экстракт чертополоха куч. 90%) проявляет антимикробную активность так же по отношению ко всем бактериальным культурам: грамположительным Staphylococcus aureus - 22-23 мм, Bacillus subtilis - 19-20 мм, а также к грамотрицательной Escherichia coli - 21-22 мм. По отношению к дрожжеподобной культуре гриба рода Кандида Candida albicans активности не наблюдали.
Следует отметить, что образцы экстрактов №1 и №2 обладают средней степенью противомикробной активности (диаметр зон задержки роста микроорганизмов 15-25 мм) по отношению к бактериальным культурам микроорганизмов. Образец №2 является более активным в сравнении с образцом №1: по отношению к Staphylococcus aureus - 22-23 мм и 20-21 мм соответственно, к Bacillus subtilis - 19-20 мм и 16-17 мм соответственно, к Escherichia coli - 21-22 мм (№2) и 18-19 мм (№1).
Выводы. На основании проведенных исследований можно сделать выводы, что полученные экстракты чертополоха курчавого обладают средней степенью антимикробной активности. При этом 90% экстракт является более активным в сравнении с 40% экстрактом: по отношению к Staphylococcus aureus - 22-23 мм и 20-21 мм соответственно, к Bacillus subtilis - 1920 мм и 16-17 мм соответственно, к Escherichia coli - 21-22 мм и 18-19 мм. Данные экстракты могут быть использованы при разработке лекарственных форм с антимикробной активностью.
ЛИТЕРАТУРА
- 1. Волянський Ю.Л., Гриценко І.С., Широбоков В.П. і інш. Вивчення специфічноі' активності протимікробних лікарських засобів: Метод. реком.- Киів, 2004.- 38 с.
- 2. Державна Фармакопея Украіни / Державне підприемство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2011. Доповнення 4. - 536 с.