Изучение аминокислотного состава травы ясменника распростертого asperula humifusa (m. bieb.) besser

АННОТАЦИЯ

В статье отражены результаты изучения аминокислотного состава травы ясменника распростертого Asperula humifusa (M. Bieb.) Besser семейства мареновые Rubiaceae Juss. методом ВЭЖХ. Идентифицированы 21 свободная и 19 связанных аминокислот, суммарное содержание которых составляет 0,46% и 10,51% соответственно.

Ключевые слова: ясменник распростертый, высокоэффективная жидкостная хроматография, аминокислоты

Одним из наиболее часто встречающихся в южных районах Украины и Крыму представителей семейства мареновые Rubiaceae Juss. является ясменник распростертый (Asperula humifusa (M. Bieb.) Besser). Растение неофицинальное, с лечебной целью в народной медицине используется трава и корневище при пневмонии, эндометрите, гепатите, заболеваниях почек, вызванных травмой, при внутренних кровоизлияниях, диарее, энтероколитах [5].

Ранее в траве A. humifusa обнаружены иридоиды, фенолкарбоновые кислоты, флавоноиды, эфирное масло, витамин С [2-4, 6, 7].

Целью данного исследования стало изучение аминокислотного состава травы A. humifusa.

Объектом исследования были образцы воздушно-сухой травы ясменника распростертого, заготовленные в фазе цветения растения в июле 2013г. в окресностях г. Евпатории АР Крым.

Материалы и методы.

Определение содержания общего азота проводили на элементном анализаторе ЕА- 3000 (EuroVector, Италия), с использованием в качестве детектора катарометра (ДТП).

Для определения свободных аминокислот к сырью добавляли 0.1 н. водный раствор хлористоводородной кислоты, содержащий 0.2% в-меркаптоэтанола и выдерживали в ультразвуковой бане в течение 2 ч. при температуре 50°С. Для определения суммы свободных и связанных аминокислот к навеске сырья (10 мг) добавляли 6 н. водный раствор хлористоводородной кислоты, содержащий 0.4% в-меркаптоэтанола и выдерживали в ультразвуковой бане в течение 24 ч. при температуре 110°С [8, 9].

Количественный анализ свободных и связанных аминокислот в исследуемых образцах проводили на жидкостном хроматографе фирмы Agilent Technologies (модель 1100), укомплектованном проточным вакуумным дегазатором G1379A, 4-х канальным насосом градиента низкого давления G13111A, автоматическим инжектором G1313A, термостатом колонок G13116A, диодноматричным детектором G1316A. При количественном определении использовали стандартные растворы аминокислот (ТУ 609-3147-83); при хроматографировании — колонку размером 4,6 х 50 мм, заполненную октадецилсилильным сорбентом, зернением 1,8 мкм, «ZORBAX-XDB-C18» и защитную предколонку; в качестве подвижной фазы — раствор А (0.05M водный раствор натрия ацетата, доведенный до pH 6.5 1-2% уксусной кислотой с добавлением 0.3%

тетрагидрофурана), раствор В (0.10 M водный раствор натрия ацетата и ацетонитрила в соотношении 23:22 соответственно, доведенный до pH 6.5 1-2% уксусной кислотой); скорость подачи подвижной фазы 1.5-2 мл/мин; рабочее давление элюента 220-275 кПа; температура термостата колонки 50° С; объем пробы 2 мкл. Детектирование проводили с помощью УФ-детектора: масштаб измерений 1.0, время сканирования 0.5 сек., длина волны детектирования 265 нм. Идентификацию аминокислот проводили по времени удерживания в сравнении со стандартными образцами [5].

Результаты и обсуждение

В результате исследований установлено, что в исследуемом сырье содержится 2,6% азота. Содержание сырого протеина, рассчитанное с использованием общего фактора 6,25, составляет 16,25%. Количественное содержание белка, рассчитанное по методике Государственной Фармакопеи РФ [1], в пересчете на связанные протеиногенные аминокислоты составляет 8,83%.

При определении аминокислотного состава методом ВЭЖХ в траве ясменника распростертого идентифицированы 21 свободная и 19 связанных аминокислот, девять из

которых являются незаменимыми - валин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, треонин, фенилаланин, гистидин, аргинин.

Схема хроматограммы содержания суммы свободных и связанных аминокислот травы ясменника распростертого приведена на рисунке 1, свободных - на рисунке 2.

30

Доминирующими (в мг/100г) являются аспарагиновая (1366,0) и глутаминовая (1524,8) кислоты, лейцин (821,6), аланин (744,2), пролин (737,2), аргинин (737,0), глутамин (697,5), серин (686,7) и лизин (569,8). Содержание свободных аминокислот составляет 0,46%, связанных - 10,51%.

Разницу в количественном содержании белка, определенном разными методами, можно объяснить наличием в растениях непротеиногенного азота, содержащегося в нуклеиновых кислотах, непротеиногенных аминокислотах, ферментах, хлорофиллах, витаминах, биогенных аминах.

Аминокислотный состав травы ясменника распростертого изучен впервые.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Государственная Фармакопея Российской Федерации, Изд-во «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», - 12-е изд.- Москва, 2008, ч. 1, 704 c.
  2. Ильина Т.В. Терпеноиды и ароматические соединения эфирных масел травы Galium hercynicum Weigel. и травы Galium humifusum Bieb. / Ильина Т.В., Ковалева А.М., Горячая О.В., Комиссаренко А.Н. // Химия природных соединений - 2011. - № 1. - С. 115-116.
  3. Ільіна Т.В. Хроматографічне дослідження фенілпропаноідів трави Galium humifusum Bieb. / Ільіна Т.В., Ковальова А.М., Горяча О.В., Гриценко О.М. // Зб. трудів НМАПО. - вип.19. - кн.3 - 2010. - 952 с. - C. 624-631.
  4. Юрченко Н.С. Аминокислотный состав травы ясменника душистого Asperula odorata L. / Юрченко Н.С., Ильина Т.В,. Ковалева А.М. // Химия природных соединений. - 2013. - №2. - С. 337-338.
  5. Флора Европейской части СССР. Т.3., Наука, Москва, 1978.- 259 с.
  6. Юрченко Н.С. Органічні кислоти трави маренки сланкоі' (Asperula humifusa (M.B.) Bess.) / Юрченко Н.С., Ільіна Т.В., Ковальова А.М // Матеріали III Всеукр. науково-практ. конф. «Хімія природних сполук» (30-31 жовтня 2012 р.). - Тернопіль, 2012. С. 55-56.
  7. Юрченко Н.С. Хромато-мас-спектрометричне дослідження етилацетатно-спиртовоі фракціі трави Asperula humifusa (M.B.) Bess. (Galium humifusum Bieb) / Юрченко Н.С., Ільіна Т.В., Ковальова А.М. // Украінський медичний альманах. - 2012 р. - Т. 15. - №3. - C. 245-246.
  8. Jambor A. Amino acid analysis by high-performance liquid chromatography after derivatization with 9-fluorenylmethyloxycarbonyl chloride. Literature overview and further study / Jambor A., Molnar-Perl I. // Journal of Chromatography A. - 1216(15). - 2009. - рр.3064-3077.
  9. Jambor A. Quantitation of amino acids in plasma by high performance liquid chromatography: Simultaneous deproteinization and derivatization with 9-fluorenylmethyloxycarbonyl chloride / Jambor A., Molnar-Perl I. // Journal of Chromatography A. - 1216(34). - 2009. - рр.6218-6223.
Теги: Химия
Год: 2014
Город: Шымкент
Категория: Медицина