Введение. С древнейших времен главным средством борьбы с различными болезнями человека были лекарственные растения, и человечество имеет огромный опыт их использования. Надо отметить, что в последние два десятилетия резко возрос интерес к лекарственным препаратам растительного происхождения, в том числе и в промышленно развитых странах. Поэтому в настоящее время при выборе фармакотерапии различных заболеваний все чаще предпочтение отдается фитопрепаратам, поскольку при их использовании клиническая эффективность сочетается с малым риском развития побочных эффектов и возможностью применения подобных лекарств у пациентов всех возрастных групп. Известно, что Кыргызская Республика обладает богатейшими растительными ресурсами, поэтому разработка фитопрепаратов с использованием местного растительного сырья, является одним из приоритетных направлений развития отечественной фармакологии и фармацевтической промышленности.
Цель исследования - разработка рецептуры и доклиническое изучение острой токсичности и переносимости фитопрепарата «Эвкамент».
Материал и методы исследования. Предметом исследования являлся фитопрепарат «Эвкамент» в виде неразбавленного «балк»-продукта, представляющего собой густую сиропообразную жидкость. Объектом исследования служили белые беспородные мыши массой тела 18-20 г. Острая токсичность изучаемого фитопрепарата при пероральном введении изучалась в соответствии с рекомендациями информационнометодического пособия ФК ДЛО и MT М3 КР «Доклиническое изучение общетоксического действия новых лекарственных веществ» [1].
Результаты и их обсуждение. При разработке рецептуры данного фитопрепарата исходили из того, что входящие в его состав лекарственные растения в течение длительного времени используются как в народной медицине, так и в научной фитотерапии, поскольку их эффективность и безопасность имеют доказательную основу [2]. Состав фитопрепарата «Эвкамент» включает в себя широкий спектр биологически активных веществ терпеновой и фенольной природы, а так же флавоноиды, коричную и элаговую кислоты, дубильные вещества, эфирные масла, витамины, микроэлементы, оказывающие отхаркивающее, антисептическое, противовоспалительное и спазмолитическое действие. Эвкалиптовое масло (Oleum Eucalipti) получают перегонкой с водой листьев различных разновидностей эвкалиптового дерева, произрастающего в Австралии, Индии, Китае, Калифорнии, Алжире, южной Франции, Испании, Португалии, Италии, Мексике, Ямайке, и мн. др. местах. Наибольшего масштаба достигло производство эвкалиптового масла из эвкалипта шаровидного и родственных ему видов эвкалипта.
Выход масла из свежих листьев около 0,75%, а из сухих — от 1,6 и до 3%. Главные составные части эфирного масла является цинеол (до 80%, сесквитерпеновые списты и углеводороды) [3]. Кроме того, содержит много дубильных веществ, галлотанины, кумаровую, коричную, элаговую кислоты, флавоноиды, смолы и воск. Обладает сильным, свежим, смолисто-терпким, холодящим, характерным запахом с камфорными тонами. Эвкалиптовое масло обладает противомикробным, противовоспалительным, болеутоляющим свойствами. Эфирное мятное масло (Oleum Menthae piperitae) - общее название большой группы эфирных масел из надземной части растений рода мята, прежде всего - масла перечной мяты и мяты полевой. Эфирные масла из мяты получают из скошенной наземной части растения, методом перегонки с водяным паром. В подвяленных растениях мяты перечной содержится до 0,5% эфирного масла, в сухих листьях - до 3%. Основное действующее вещество мятного масла - ментол, содержание которого в зависимости от сорта мяты может достигать 70%, содержит также эфиры ментола с уксусной, валериановой и другими кислотами [3]. Эфирное мятное масло - бесцветная жидкость с ароматом мяты и горьковатым холодящим вкусом, обладает слабыми местноанестизирующими свойствами, стимулирует холодовые рецепторы кожи и слизистых, обладает слабыми антисептическими свойствами. Широко используется в фармацевтической и пищевкусовой промышленности в качестве ароматизатора.
Экстракт солодкового корня (Radix Glycyrrhiza glabra L.). Лекарственным сырьем у растения являются корни и подземные побеги, которые содержат тритерпеновый сапонин глицирризин (23%), ряд флавоноидов (ликвиритин, ликвиритозид и др.), ситостерин, крахмал, сахарозу, глюкозу, маннит, слизь, камеди, аскорбиновую кислоту [3]. 3а последнее время интерес к солодке со стороны многих ученых значительно повысился в связи с изучением тритерпеновых соединений, близких по строению к гормонам надпочечника. Среди этих соединений особый интерес представляют глицирризиновая и глициретовая кислоты, содержащиеся в подземных органах солодки. Препараты солодки усиливают секрецию железистого аппарата, обладают протвовоспалительным, спазмолитическим, холинолитическим и антигистаминным свойствами, в связи с чем входят в состав многих отхаркивающих, слабительных и мочегонных средств. Отхаркивающие свойства связывают с содержанием в ее корнях глицирризина, который усиливает секреторную функцию верхних дыхательных путей и повышает активность реснитчатого эпителия в трахее и бронхах. Благодаря флавоноидным соединениям препараты солодки действуют спазмолитически на гладкие мышцы бронхов. В солодке содержатся вещества, близкие как по своему строению, так и по действию к стероидным гормонам, которые вырабатываются корковым слоем надпочечников и обладают противовоспалительными свойствами. Из солодки выделили ряд биологически активных веществ, снижающих уровень холестерина в крови. Применение в медицине обусловлено проивовоспалительным, отхаркивающим, мягчительным и обволакивающим эффектами.
При длительном применении препаратов солодки возможно повышение артериального давления, задержка жидкости в организме вплоть до появления отеков, нарушения в половой сфере - ослабление либидо, развитие гинекомастии, ограничение или исчезновение оволосения и другие нежелательные эффекты. Экстракт чабреца (Thymus serpyllum L.). Лекарственное сырьё - облиственные веточки растения, содержит 0,1-0,6% эфирного масла, основным компонентом которого (до 30%) является тимол [4]. В состав эфирного масла входят также цинеол и другие соединения, обладающие выраженным антибактериальным действием. Кроме того, в листьях растения обнаружены урсуловая и олеиновая кислоты, горечи, флавоноиды, дубильные вещества. В медицинской практике препараты чабреца применяют как отхаркивающее и дезинфицирующее средство при воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей.
В качестве вспомогательных веществ в рецептуру препарата включены карбамид (Urea pura), лимонная кислота (Citric acid), сахарный песок (Sacharum), краситель зеленый CT 7020 WS AP (Хлорофиллин/турмерик (куркумин) и патока (Maltose syrupus, Dextrinmaltosa). Исследуемый фитопрепарат «Эвкамент», состоящий из вышеприведенной композиции, представляет собой пастилки для рассасывания светло-зеленого цвета, с характерным запахом. При визуальной оценке каких-либо признаков взаимодействия компонентов препарата не отмечалось. Первым необходимым условием при изучении токсикологии фармакологически активных соединений, является определение параметров острой токсичности (LD50). Эти показатели необходимы для установления степени опасности лекарственного средства для животных, а также для дальнейших исследований, где требуется знание об основных показателях токсичности исследуемого вещества.
Для оценки токсичности фармакологических препаратов принято использование «Классификации опасности веществ по степени воздействия на организм» [5], предложенной Н.Ф. Измеровым, Н.В. Соноцким, и К.К. Сидоровым [6, 7]. Эксперименты проводились на 20 белых беспородных мышах обоего пола, массой тела 18 - 22 г, полученных из одного питомника и прошедших двухнедельный карантин в виварии по месту выполнения исследований. Мышей содержали в клетках по 5 особей на подстилке из древесных стружек. Животные имели свободный доступ к корму и водопроводной питьевой воде. Для питья использовали поилки (стеклянные бутыли по 500 мл с конической пробкой из нержавеющей стали с отверстием в центре). Каждую дозу препарата испытывали на группе из десяти белых мышей. За 12 часов до введения препарата животные лишались корма. Экспериментальные животные были разделены на 2 группы: 1 группа - животные этой группы служили контролем; мыши 2 группы получали «балк»-продукт «Эвкамент».
Исходя из предельно допустимых объемов вводимой жидкости на одно животное, изучаемый препарат вводился мышам в желудок однократно с помощью шприца и защищенной инъекционной иглы (с оливой) в количестве 1 мл на одну особь. Контрольным животным вводился эквивалентный объем дистиллированной воды. Мыши находились в условиях вивария на стандартной диете, пищу получали в одно и тоже время суток. Оценка результатов эксперимента проводилась через одни сутки после введения изучаемого препарата, учитывалось количество погибших животных [8]. В дальнейшем наблюдение за подопытными животными производилось еще в течение 2 недель от момента введения препарата. Ежедневно учитывались следующие интегральные показатели: общее состояние животных, интенсивность и характер двигательной активности, состояние кожного покрова, тонус скелетных мышц, наличие и характер судорог, реакция на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частота и глубина дыхательных движений, количество и консистенция фекальных масс, частота мочеиспускания и окраска мочи, потребление корма и воды.
При ежедневных визуальных наблюдениях в течение 14 суток выявлена 100% выживаемость экспериментальных животных как контрольной, так и опытной групп. В течение первых двух часов после введения препарата у животных опытной группы были отмечены некоторые изменения в поведении: животные этой группы не употребляли корм и воду, у них наблюдалось некоторое снижение двигательной активности. Описанные изменения состояния животных опытной группы через 30-40 минут после введения препарата постепенно уменьшались и полностью исчезали через 3-4 часа после введения изучаемого препарата. На вторые сутки эксперимента животные опытных групп уже ничем не отличались от контрольных животных. Наблюдение за животными контрольной и опытной групп в течение последующих 14 дней после введения препарата показало, что ни в одном случае гибели животных отмечено не было. Общее состояние животных, как и другие исследуемые интегральные показатели у подопытных животных, получавших фитопрепарат «Эвкамент», ничем не отличались от показателей животных контрольной группы. Кроме того, анализ результатов исследования острой токсичности «балк»-продукта фитопрепарата «Эвкамент» показал отсутствие существенных отличий по половой чувствительности к препарату, т.е. его воздействие, как на самцов, так и на самок было идентичным.
Таким образом, проведенные нами экспериментальные исследования показали, что фитопрепарат «Эвкамент» при однократном введении в желудок мышам в дозе и 50 мл/кг токсическим действием практически не обладает. При пероральном введении препарата в максимально возможной дозе регистрировались слабо выраженные признаки интоксикации. В связи с тем, что летальных исходов среди экспериментальных животных не было, установить показатель ЛД50 препарата при его однократном введении в желудок не удалось.
Выводы 1. Разработана рецептура фитопрепарата «Эвкамент» из местного лекарственного сырья, обладающего проивовоспалительным, антисептическим, отхаркивающим, мягчительным эффектами. 2. При однократном пероральном введении изучаемого препарата в максимально возможной дозе у экспериментальных животных регистрировались слабые и быстропроходящие признаки интоксикации. Г ибели животных под воздействием изученных доз препарата не наблюдалось. 3. Результаты изучения острой токсичности фитопрепарата «Эвкамент» в виде неразбавленного «балк»-продукта позволяют отнести фитопрепарат «Эвкамент» к категории относительно безвредных веществ (VI класс токсичности).
ЛИТЕРАТУРА
- Доклиническое изучение общетоксического действия новых лекарственных веществ». - Бишкек, 2001.
- Чухно Т. Большая энциклопедия лекарственных растений. - Москва: ЭКСМО, 2007. - 987с.
- ГФ СССР X изд. - Москва: «Медицина», 1968. - 1079с.
- ГФ СССР XI изд. - Москва: «Медицина», 1989. - Т.2. - 398 с.
- ГОСТ 12.1.007-76 Оценка токсичности фармакологических препаратов. Классификация опасности веществ по степени воздействия на организм.
- Измеров Н.Ф., Саноцкий Н.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. Справочник. - М.: Медицина, 1977. - С. 239.
- Березовская И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности // Хим.- фарм. Журнал. - 2003. - Т. 37. - № 3.- С. 32—33.
- Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - 2 изд., перераб и дополнен. - Ленинград: «Медгиз», 1963. - 152с.