Исследования последних лет показывают, что состояние клеток крови отражает состояние внутренних органов, в связи с тем, что активность внутриклеточных ферментов связана с функциональным состоянием организма [1, 2]. Так, было доказано, что лимфоциты-это клетки, выполняющие не только специальные функции иммунной защиты, но и являющиеся элементами единой информационной системы, точно отражающей состояние организма и процесс его развития [3]. Известно, что функциональная активность лимфоцитов целиком определяется их метаболизмом, зависящим в значительной степени от уровней дегидрогеназной активности.
Целью настоящего исследования явилась оценка активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в лимфоцитах периферической крови у детей больных вирусным гепатитом А (ВГА). Цитохимические исследования лимфоцитов у 32 детей больных ВГА для изучения ферментативной активности сукцинатдегидрогеназы с вычислением морфометрических и денситометрических параметров проведены методом компьютерной морфоденситометрии (КМДМ) на аппаратно-программном комплексе «ДиаМорф». Обследованные дети были разделены на 2 группы: больные ВГА с сопутствующей железодефицитной анемией (ЖДА) и больные ВГА без анемии. Контрольную группу для цитохимических исследований составили 9 практически здоровых детей. Нами проводилась оценка морфометрических и денситометрических параметров гранул сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах периферической крови. Морфометрические параметры включали количество (Count), площадь (Area), периметр (Perim) и диаметр депозитов (Dcirc) ферментативной реакции. Денситометрическая характеристика изучалась по таким параметрам как, средняя оптическая плотность (OD),
средняя интенсивность (Grva), среднее оптическое пропускание (Trans) и интегральная оптическая плотность (IOD). Для количественной оценки функционально-морфологических признаков объекта использовался интегрированный пакет прикладных программ Cito. Статистическая обработка результатов, построение графиков проводились с использованием программ Microsoft Excel и STATISTICA 6.0. Для визуальной оценки морфоденситометрических показателей у больных с вирусным гепатитом, с вирусным гепатитом на фоне анемии, и у здоровых детей были построены категоризированные графики «Бокса-Вискера».
В ходе исследования, мы установили следующую тенденцию распределения продукта цитохимической реакции в лимфоцитах: клетки больных с ВГА характеризовались меньшим количеством гранул СДГ, уменьшением их площади, периметра и диаметра по сравнению со здоровыми детьми. Так, если показатель Count по группе здоровых детей составил 198,88±17,55 усл.ед., то по группе детей, больных ВГА на фоне ЖДА - 84,0±8,46 усл.ед., без анемии - 82,0±4,69 усл.ед (в обоих случаях величина р<0,001). Обращает внимание отсутствие достоверного различия по данному показателю между двумя последними сравниваемыми группами (р>0,05). График Бокса-Вискера (рис. 1) позволяет визуально оценить полученные данные по количеству гранул СДГ.
Наряду со снижением количества гранул СДГ, у группы больных ВГА без анемии наблюдалось уменьшение площади на 45,9% и больных ВГА с ЖДА - на 34,8%. Определенные изменения отмечались и в денситометрических параметрах у больных ВГА детей. В показателях таких параметров, как средняя интенсивность, среднее оптическое пропускание и средняя оптическая плотность, определяется достоверное снижение в случаях заболевания детей ВГА, по сравнению со здоровыми детьми (р<0,001). Однако, между группами больных ВГА с ЖДА и без анемии существенного различия не выявлено (р>0,05). Графики Бокса- Вискера, построенные по данным определений среднего оптического пропускания (рис. 2), наглядно демонстрируют общую тенденцию денситометрических параметров.
Наибольшую информативность о ферментативной активации лимфоцитов представляют данные, характеризующие интегральную оптическую плотность (IOD). У обследованных нами здоровых детей средняя
248величина IOD составила 9738,63+574,5 усл.ед., что достоверно выше по сравнению с показателями в группе больных ВГА с сопутствующей ЖДА - 6339,87+700,8 усл.ед. (р<0,01), и больных детей без анемии - 5862,75+485,9 усл.ед.(р<0,001). Следует отметить превышение данного показателя у детей больных ВГА на фоне ЖДА на 477,12 усл.ед., чем у больных без анемии. На рис. 3,4,5 представлены гистограммы распределения показателей среднего оптического пропускания, средней оптической плотности и интегральной оптической плотности гранул СДГ лимфоцитов больного ребенка.
Снижение активности сукцинатдегидрогеназы в клетках крови у детей при заболевании ВГ свидетельствует об угнетении гликолитических процессов в лимфоцитах. При патологическом процессе изменения затрагивают в первую очередь гранулы СДГ фермента в отдельно лежащих митохондриях, у которых сначала изменяется площадь, а затем оптическая плотность. Более тяжелые патологические состояния приводят к уменьшению функциональной активности как отдельно лежащих гранул, так и кластеров. Особого внимания заслуживает факт некоторого повышения активности СДГ фермента у детей с ЖДА по сравнению с больными ВГ без анемии. Это может быть расценено как мобилизация энергетических ресурсов благодаря ускорению окисления сукцинатов в условиях гипоксии, обусловленной анемией, когда НАД зависимый транспорт электронов в дыхательной цепи тормозится, а активность сукцинатдегидрогеназы и эндогенного сукцината возрастает. В целом, в результате проведенного цитохимического исследования нам удалось изучить ферментативную активность СДГ лимфоцитов крови методом КМДМ при ВГА, протекающий на фоне ЖДА и без анемии. Созданная на сегодняшний день современная технология анализа изображения клеточных структур позволила нам получить достоверно высокие и информативные количественные данные, характеризующие цитохимические изменения при ВГ.
249
ЛИТЕРАТУРА
- Суслова Г.Ф. Динамика ферментного статуса клеток и тканей при болезнях органов пищеварения (экспериментально-клиническое исследование): автореф. ... докт.биол.наук:.03.00.25. - M., 1991. - 30 с.
- Комиссарова И.А., Нарциссов Р.П. Новые подходы к оценке эффективности терапии на основе индивидуального прогнозирования //Акт. пробл. оценки фармакологической активности химических соединений.: сб.науч.тр. - M., 1981. - С. 25-26.
- Шищенко В.M., Петричук С.В., Духова З.Н., Крепец В. Новые возможности цитохимического анализа в оценке состояния здоровья ребенка и прогнозе его развития //Педиатрия. - 1998. - №4. - С. 96-100.