Определение кинетики роста trichomonas vagin alis in vitro

Настоящая работа направлена на определение динамики цикла роста клинических штаммов T. влагалищной. Все штаммы показали аналогичные показатели роста, характеризующиеся ранним, но медленным ростом, расширением длительности логарифмической фазы и ограничением срока выживаемости, не превышающим 120 часов.

Эти результаты могут способствовать лучшему пониманию жизненного цикла, инфекционности паразита в условиях естественной инфекции, эпидемиологии и клинических проявлений инфекции

ВВЕДЕНИЕ.

В структуре инфекций, передаваемых половым путем одно из ведущих мест занимает урогенитальный трихомоноз (УГТ) [1,2,3]. Распространенность УГТ в развитых странах у женщин и мужчин колеблется в диапазоне от 5 до 20% и от 2 до 10 % соответственно. Вызывает серьезную

озабоченность увеличение доли половой трансмиссии ВИЧ- инфекции [4,5] при УГТ. Установленная взаимосвязь между хроническим трихомонозом и раком шейки матки у женщин и бесплодием у мужчин [6,7,8], обосновывает необходимость исследований биологических свойств, адаптивной способности, цикла роста и степени инфекционности Trichomonas vaginalis в условиях естественной инфекции. В связи с этим целью работы явилось изучение динамики роста и жизнеспособности клинических штаммов Trichomonas vaginalis в лабораторных условиях культивирования.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Лабораторную диагностику УГТ проводили общепринятыми бактериоскопическим и бактериологическим методами. Культивирование T.vaginalis проводили с использованием селективных питательных сред: среда СКДС, модифицированная среда с основой водного экстракта плаценты человека (заявка на патент на полезную модель № 2015/02052 от 9 июля 2015 г).

Для определения кинетики роста T.vaginalis 10 клинических штаммов были культивированы на питательной среде в течение 7 дней с ежедневным контролем жизнеспособности простейших. Подсчет клеток трихомонад проводили в камере Горяева по общепринятой методике. Определяли количество, подвижность, морфологию простейших с интервалом в 18, 20, 24, 48, 72, 96, 120 и 144 ч. Кривые роста были сделаны путем вычисления среднего количества жизнеспособных подвижных трихомонад в трех отдельных суспензиях каждого штамма. Популяции подвижных трихомонады определяли в указанные временные интервалы.

Использовали методы вариационной статистики с определением среднеарифметической (М), средней ошибки среднеарифметической (m), критерия Фишера (t). Результаты считались достоверными при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Для определения кинетики роста T.vaginalis 10 клинических штаммов были культивированы на питательной среде в течение 7 дней с ежедневным контролем жизнеспособности трихомонад. Подсчет клеток трихомонад проводили в камере Горяева по общепринятой методике.

Определяли количество, подвижность, морфологию простейших с интервалом в 18, 20, 24, 48, 72, 96, 120 и 144 ч. Кривые роста были сделаны путем вычисления среднего количества жизнеспособных подвижных трихомонад в трех отдельных суспензиях каждого штамма. Популяции подвижных трихомонады каждого штамма в культурах и в суспензиях определяли под микроскопом в счетной камере Горяева в определенные временные интервалы. Определение динамики роста 10 клинических штаммов Trichomonas vaginalis показало аналогичные показатели у всех штаммов.

Кривая роста трихомонад показывает зависимость логарифма числа живых клеток от времени и имеет S- образную форму и позволяет различить несколько фаз роста, сменяющих друг друга в определенной последовательности и в большей или меньшей степени выраженных: начальную (или лаг-) фазу, экспоненциальную (или логарифмическую) фазу, стационарную фазу и фазу отмирания. Цикл развития характеризовался ранним, но медленным ростом, расширением длительности логарифмической фазы и ограничением срока гибели не более 144 ч. Стационарная и фаза снижения продолжались 24 ч и 72 ч соответственно (Рисунок 1).

 

Начальная фаза охватывает промежуток времени между инокуляцией и достижением максимальной скорости деления. Продолжительность этой фазы зависит главным образом от предшествовавших условий культивирования и возраста инокулята, а также от того, насколько пригодна для роста данная среда.

Экспоненциальная (логарифмическая) фаза роста характеризуется постоянной максимальной скоростью деления клеток. В экспоненциальной фазе скорость деления клеток относительно постоянна, эта фаза наиболее удобна для определения скорости деления (и скорости роста). Переход от экспоненциальной фазы к стационарной происходит постепенно. Скорость роста снижается не только из-за нехватки субстрата, но также, возможно, из-за накопления токсичных продуктов обмена; все эти факторы вызывают переход к стационарной фазе.

Как видно из представленного графика, наибольший пик роста простейших наблюдается к 3 дню культивирования с последующим снижением к 5 дню, но жизнеспособные трихомонады были обнаружены после инкубации в течение 120 час. Последовательные переходы от фазы 1 к фазе 4 наблюдаются в значительной степени за счет истощения субстратов, необходимых для роста популяции клеток, или же за счет накопления токсичных продуктов их жизнедеятельности.

Эта работа выявила некоторые важные элементы динамики роста Trichomonas vaginalis и подтвердил пригодностьпитательных сред для культивирования и сохранения простейших. Раннее начало роста простейших отражает их высокую адаптационную способность, а также элективные свойства разработанной питательной среды. Медленный рост, длительность времени, необходимого для максимального роста трихомонад (фаза максимального роста) сходны с культуральными особенностями медленно растущих бактерий; с другой стороны, короткая продолжительность стационарной фазы и периода спада сходны с высоко требовательными микроорганизмами, которые чувствительны к истощению питательных веществ и накоплению токсичных побочных продуктов в питательной среде. Однако наблюдаемая низкая плотность простейших на всех этапах роста и, следовательно, отсутствие эффекта накопления популяции [9], определяет способность простейших к выживанию в ограниченном количестве [10]. Эти культуральные особенности соответствуют клиническим особенностям и течению естественной трихомонадной инфекции.

Таким образом, полученные результаты представляют теоретическую базу для разработки адекватных моделей, прогнозирующих динамику популяций простейшего в природных условиях, а также для разработки оптимальных алгоритмов управления ростом и физиологической активностью данной группы патогенов.

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Шакиров М.Т.. Состояние и перспективы дерматовенерологической службы в Республике Казахстан // Материалы II Международной конференции «Современные аспекты эпидемиологии, клиники, диагностики, профилактики, терапии дерматозов и инфекций, передаваемых половым путем». - Алматы: 2003. - 223 с.
  2. Aкышбаева К.С., КалоидиИ.А., ДжусупгалиеваМ.Х. Этиологическая структура воспалиетельных заболеваний урогенитальноготракта и роль Trichomonasvaginalis в их развитии // Материалы Международ.научно-практ.конф. «Возрастные аспекты дермато-косметологии и дермато-венерологии». - Астана: 2007. - С. 127-128.
  3. Johnston VJ, Mabey DC.Global epidemiology and control of Trichomonas vaginalis // CurrOpin Infect Dis. - 2008. - №21. - Р. 56-64.
  4. Трумова Ж.З., Акышбаева К.С., Джумабаева С.М. Вирус иммунодефицита человека и инфекции, передаваемые половым путем среди уязвимых групп населения Казахстана // Андрология и генитальная хирургия. - 2015. - №2. - С.16-21.
  5. Mc. Clelland RS, Sangare L, Hassan WM, et al. Infection with Trichomonas vaginalis increases the risk of HIV-1 acquisition // J Infect Dis. - 2007. - №195. - Р. 698-702.
  6. Siegel, R., Naishadhan, D. and Jemal, A. Cancer statistics // CA Cancer J. Clin.-2012. - № 62. - Р. 10-29.
  7. Stark, J. R., Judson, G.; Alderate, J. F.; Mundodi, V.; Kucknoor, A. S.; Giovannucci, E. L.; Platz, E. A.; Sutcliffe, S.; Fall, K.; Kurth, T.; Ma, J.; Stampfer, M. J. and Mucci, L. A. Prospective study of Trichomonas vaginalis infection and prostate cancer incidence and mortality: Physcians' Health Study // J. Natl. Cancer Inst. - №101.- Р. 1-6.
  8. Sutcliffe, S., Alderate, J. F.; Till, C.; Goodman, P. J.; Hsing, A. W.; Zenilman, J. M.; De-Marzo, A. M. and Platz, E. A. Trichomonosis and subsequent risk of prostate cancer in the prostate cancer prevention trail // Int. J. Cancer. - 2009. - №124. - Р. 2082-2087.
  9. FeinbergJG, WhittingtonJM.A culture medium for TrichomonasvaginalisDonne and species of Candida // JClinPathol. - 1957. - №10. - Р. 327-329.
  10. Catterall RD. Trichomonal infections of the genital tract // MedClinNorthAm. -1972. - №56. - Р. 1203-1209.
Год: 2016
Город: Алматы
Категория: Медицина