Настоящая работа направлена на определение динамики цикла роста клинических штаммов T. влагалищной. Все штаммы показали аналогичные показатели роста, характеризующиеся ранним, но медленным ростом, расширением длительности логарифмической фазы и ограничением срока выживаемости, не превышающим 120 часов.
Эти результаты могут способствовать лучшему пониманию жизненного цикла, инфекционности паразита в условиях естественной инфекции, эпидемиологии и клинических проявлений инфекции
ВВЕДЕНИЕ.
В структуре инфекций, передаваемых половым путем одно из ведущих мест занимает урогенитальный трихомоноз (УГТ) [1,2,3]. Распространенность УГТ в развитых странах у женщин и мужчин колеблется в диапазоне от 5 до 20% и от 2 до 10 % соответственно. Вызывает серьезную
озабоченность увеличение доли половой трансмиссии ВИЧ- инфекции [4,5] при УГТ. Установленная взаимосвязь между хроническим трихомонозом и раком шейки матки у женщин и бесплодием у мужчин [6,7,8], обосновывает необходимость исследований биологических свойств, адаптивной способности, цикла роста и степени инфекционности Trichomonas vaginalis в условиях естественной инфекции. В связи с этим целью работы явилось изучение динамики роста и жизнеспособности клинических штаммов Trichomonas vaginalis в лабораторных условиях культивирования.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Лабораторную диагностику УГТ проводили общепринятыми бактериоскопическим и бактериологическим методами. Культивирование T.vaginalis проводили с использованием селективных питательных сред: среда СКДС, модифицированная среда с основой водного экстракта плаценты человека (заявка на патент на полезную модель № 2015/02052 от 9 июля 2015 г).
Для определения кинетики роста T.vaginalis 10 клинических штаммов были культивированы на питательной среде в течение 7 дней с ежедневным контролем жизнеспособности простейших. Подсчет клеток трихомонад проводили в камере Горяева по общепринятой методике. Определяли количество, подвижность, морфологию простейших с интервалом в 18, 20, 24, 48, 72, 96, 120 и 144 ч. Кривые роста были сделаны путем вычисления среднего количества жизнеспособных подвижных трихомонад в трех отдельных суспензиях каждого штамма. Популяции подвижных трихомонады определяли в указанные временные интервалы.
Использовали методы вариационной статистики с определением среднеарифметической (М), средней ошибки среднеарифметической (m), критерия Фишера (t). Результаты считались достоверными при р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ.
Для определения кинетики роста T.vaginalis 10 клинических штаммов были культивированы на питательной среде в течение 7 дней с ежедневным контролем жизнеспособности трихомонад. Подсчет клеток трихомонад проводили в камере Горяева по общепринятой методике.
Определяли количество, подвижность, морфологию простейших с интервалом в 18, 20, 24, 48, 72, 96, 120 и 144 ч. Кривые роста были сделаны путем вычисления среднего количества жизнеспособных подвижных трихомонад в трех отдельных суспензиях каждого штамма. Популяции подвижных трихомонады каждого штамма в культурах и в суспензиях определяли под микроскопом в счетной камере Горяева в определенные временные интервалы. Определение динамики роста 10 клинических штаммов Trichomonas vaginalis показало аналогичные показатели у всех штаммов.
Кривая роста трихомонад показывает зависимость логарифма числа живых клеток от времени и имеет S- образную форму и позволяет различить несколько фаз роста, сменяющих друг друга в определенной последовательности и в большей или меньшей степени выраженных: начальную (или лаг-) фазу, экспоненциальную (или логарифмическую) фазу, стационарную фазу и фазу отмирания. Цикл развития характеризовался ранним, но медленным ростом, расширением длительности логарифмической фазы и ограничением срока гибели не более 144 ч. Стационарная и фаза снижения продолжались 24 ч и 72 ч соответственно (Рисунок 1).
Начальная фаза охватывает промежуток времени между инокуляцией и достижением максимальной скорости деления. Продолжительность этой фазы зависит главным образом от предшествовавших условий культивирования и возраста инокулята, а также от того, насколько пригодна для роста данная среда.
Экспоненциальная (логарифмическая) фаза роста характеризуется постоянной максимальной скоростью деления клеток. В экспоненциальной фазе скорость деления клеток относительно постоянна, эта фаза наиболее удобна для определения скорости деления (и скорости роста). Переход от экспоненциальной фазы к стационарной происходит постепенно. Скорость роста снижается не только из-за нехватки субстрата, но также, возможно, из-за накопления токсичных продуктов обмена; все эти факторы вызывают переход к стационарной фазе.
Как видно из представленного графика, наибольший пик роста простейших наблюдается к 3 дню культивирования с последующим снижением к 5 дню, но жизнеспособные трихомонады были обнаружены после инкубации в течение 120 час. Последовательные переходы от фазы 1 к фазе 4 наблюдаются в значительной степени за счет истощения субстратов, необходимых для роста популяции клеток, или же за счет накопления токсичных продуктов их жизнедеятельности.
Эта работа выявила некоторые важные элементы динамики роста Trichomonas vaginalis и подтвердил пригодностьпитательных сред для культивирования и сохранения простейших. Раннее начало роста простейших отражает их высокую адаптационную способность, а также элективные свойства разработанной питательной среды. Медленный рост, длительность времени, необходимого для максимального роста трихомонад (фаза максимального роста) сходны с культуральными особенностями медленно растущих бактерий; с другой стороны, короткая продолжительность стационарной фазы и периода спада сходны с высоко требовательными микроорганизмами, которые чувствительны к истощению питательных веществ и накоплению токсичных побочных продуктов в питательной среде. Однако наблюдаемая низкая плотность простейших на всех этапах роста и, следовательно, отсутствие эффекта накопления популяции [9], определяет способность простейших к выживанию в ограниченном количестве [10]. Эти культуральные особенности соответствуют клиническим особенностям и течению естественной трихомонадной инфекции.
Таким образом, полученные результаты представляют теоретическую базу для разработки адекватных моделей, прогнозирующих динамику популяций простейшего в природных условиях, а также для разработки оптимальных алгоритмов управления ростом и физиологической активностью данной группы патогенов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Шакиров М.Т.. Состояние и перспективы дерматовенерологической службы в Республике Казахстан // Материалы II Международной конференции «Современные аспекты эпидемиологии, клиники, диагностики, профилактики, терапии дерматозов и инфекций, передаваемых половым путем». - Алматы: 2003. - 223 с.
- Aкышбаева К.С., КалоидиИ.А., ДжусупгалиеваМ.Х. Этиологическая структура воспалиетельных заболеваний урогенитальноготракта и роль Trichomonasvaginalis в их развитии // Материалы Международ.научно-практ.конф. «Возрастные аспекты дермато-косметологии и дермато-венерологии». - Астана: 2007. - С. 127-128.
- Johnston VJ, Mabey DC.Global epidemiology and control of Trichomonas vaginalis // CurrOpin Infect Dis. - 2008. - №21. - Р. 56-64.
- Трумова Ж.З., Акышбаева К.С., Джумабаева С.М. Вирус иммунодефицита человека и инфекции, передаваемые половым путем среди уязвимых групп населения Казахстана // Андрология и генитальная хирургия. - 2015. - №2. - С.16-21.
- Mc. Clelland RS, Sangare L, Hassan WM, et al. Infection with Trichomonas vaginalis increases the risk of HIV-1 acquisition // J Infect Dis. - 2007. - №195. - Р. 698-702.
- Siegel, R., Naishadhan, D. and Jemal, A. Cancer statistics // CA Cancer J. Clin.-2012. - № 62. - Р. 10-29.
- Stark, J. R., Judson, G.; Alderate, J. F.; Mundodi, V.; Kucknoor, A. S.; Giovannucci, E. L.; Platz, E. A.; Sutcliffe, S.; Fall, K.; Kurth, T.; Ma, J.; Stampfer, M. J. and Mucci, L. A. Prospective study of Trichomonas vaginalis infection and prostate cancer incidence and mortality: Physcians' Health Study // J. Natl. Cancer Inst. - №101.- Р. 1-6.
- Sutcliffe, S., Alderate, J. F.; Till, C.; Goodman, P. J.; Hsing, A. W.; Zenilman, J. M.; De-Marzo, A. M. and Platz, E. A. Trichomonosis and subsequent risk of prostate cancer in the prostate cancer prevention trail // Int. J. Cancer. - 2009. - №124. - Р. 2082-2087.
- FeinbergJG, WhittingtonJM.A culture medium for TrichomonasvaginalisDonne and species of Candida // JClinPathol. - 1957. - №10. - Р. 327-329.
- Catterall RD. Trichomonal infections of the genital tract // MedClinNorthAm. -1972. - №56. - Р. 1203-1209.