Данное изделие в составе трех активных веществ: коллаген, гиалуроновая кислота и фибриноген имеет эффективность регенерации ран. В данной статье разработан оптимальный состав и технология покрытия на основе природных полимеров. Проведено стандартизация препарата согласно нормативным документам. Определен стабильность препарата при условии долгосрочного хранения. Выполнена фармацевтическая разработка покрытия на основе природных полимеров применяемая в клинической хирургии.
Ведение. В настоящее время в фармацевтической биотехнологии широко развивается тенденция создания препаратов пролонгированного действия на основе природных компонентов. Данные препараты не обладают токсическим, аллергическим и кумулятивным действием, которые вызывают повреждение тканей или органов. Наиболее эффективными в этой области являются препарат на основе коллагена и гиалуроновой кислоты. Раневые покрытия на их основе обладают противовоспалительными, регенерирующими и гемостатическими свойствами, препятствуют образованию рубцовой ткани. Применение биопокрытий на основе природных полимеров позволит значительно ускорить процесс регенерации поврежденных тканей и будут эффективны в клинической комбустиологии и хирургии [1].
Современный этап развития фармацевтической технологии характеризуется поисками новых вспомогательных веществ, тщательное изучение которых привело к обоснованному заключению об отсутствии их индифферентности. В связи с этим выбор вспомогательных веществ должен проводиться с учетом их наиболее рационального сочетания с лекарственными веществами, позволяющими понизить лечебную дозу последних, пролонгировать действие, повысить эффективность. Большое внимание уделяется рассасывающимся материалам, которые, выполняя функцию временного направляющего каркаса для регенерации, замещаются постепенно собственными тканями организма.
Выбор высокоэффективных носителей, обеспечивающих оптимальную активность лекарственных веществ, является одной из задач комплексной программы научных исследований.
Целью данной работы было разработка технологии раневого покрытия на основе коллагена, гиалуроновой кислоты и компонентов фибринового клея. Данный препарат обладает гемостатическими и ранозаживляющими свойствами. Для производства «Biotangish®FT» будет использовано отечественное сырье. Данный факт будет способствовать импортозамещению и снижению цены на препарат [2,3].
Работа выполнена в рамках проекта «Коммерциализация технологий» по подпроекту «Биопокрытия на основе природных полимеров для лечения ожоговых и хирургических ран».
Материалыи методы. В работе использовали лиофильно высушенный фибриноген и тромбин, гиалуроновую кислоту (производитель компания «Shiseido») и отечественное сырье сухожильный коллаген. Используемые в методике стандартные образцы соответствует фармакопейным требованием.
Определение проводили используя физические, физикохимические, микробиологические, методы коагуляции.
Проводили идентификацию на коллаген путем специфичного энзиматического растворения в растворе коллагеназы. Гиалуроновая кислота определяется методом растворения в серной кислоте, с добавлением 0.5¿ раствора карбазола испытуемый раствор должен образовать фиолетовое или красновато фиолетовое окрашивание. Фибриноген и рибофлавин должны иметь максимум поглощения при длине волны 546 нм. Тромбин при добавлении фосфатного буферного раствора рН 7.4 в течении 5-7 минут должен образовать сгусток. Количественное определение проводят на аппарате коагулометр TS 4000 (производитель США), путем учета время свертываемости крови, на калибровочном графике находят концентрацию фибриногена и тромбина согласно составу активных веществ 1 см2 мембраны.
Нами была проведена оценка качества полученных компонентов по показателям, предъявляемым нормативными документами: описание, идентификация, потеря в массе при высушивании, микробиологическая чистота, количественное определение действующих веществ.
Исследование стабильности биопокрытий проводится методом долгосрочных испытаний, так как они содержат термолабильные субстанции природного происхождения. Условия проведения долгосрочных испытаний максимально приближены к предполагаемым условиям хранения препарата белкового происхождения: температура хранения (не выше 25Ã2) °С, относительная влажность (65Ã5) ¿.
При исследовании стабильности опытно-промышленных серий биопокрытия изучали показатели, включенные в оценку качества готового продукта. Периодичность контроля образцов составляла: 0, 3, 6, 9, 12, 18 месяцев, что позволило подтвердить устойчивость активных компонентов в течение 24 месяцев в соответствии с результатами.
Результаты. Разработан оптимальный состав биопокрытия, в качестве действующего вещества использовали фибриноген и тромбин. Для разработки состава биопокрытия нами предлагается 5 моделей, отличающихся составом вышеперечисленных вспомогательных веществ. Результаты представлены в таблице 1[4].
Таблица 1 - Модели биопокрытия
|
Ингредиентты |
Модели |
||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
|
Активные вещества |
|||||
|
Фибриноген (мг) |
1,0-2,0 |
2,0-4,0 |
3,5-5,5 |
4,0-5,0 |
5,0 |
|
Тромбин (МЕ) |
0,5-1,0 |
1,0-1,5 |
1,0-2,0 |
1,5-2,5 |
2,0-3,0 |
|
Вспомогательные вещества |
|||||
|
Коллаген (мг) |
1,0-2,0 |
1,0-2,0 |
1,0-2,0 |
1,0-2,0 |
1,0-2,0 |
|
Гиалуроновая кислота (мг) |
0,5-1,0 |
0,5-1,0 |
0,5-1,0 |
0,5-1,0 |
- |
|
Натрий цитрат (мг) |
0,2 |
0,3 |
0,4 |
0,5 |
0,6 |
|
Натрий хлорид (мг) |
1,5 |
1,5 |
1,5 |
1,5 |
1,5 |
|
Спирт 96% |
- |
- |
- |
20,00 |
- |
|
Рибофлавин (мг) |
0,30 |
0,20 |
0,20 |
- |
0,30 |
|
Фурацилин |
- |
- |
- |
0,20 |
- |
|
Размеры мембраны |
4.0х4.0х0.5 |
4.0х4.0х0.5 |
4.0х4.0х0.5 |
4.0х4.0х0.5 |
4.0х4.0х0.5 |
Наиболее оптимальной моделью биопокрытия оказалась модель № 3, которая по своей консистенции удобна для лечения ожоговых и хирургических ран и более длительной его фиксации. Другие составы не подходили по своей консистенции, так как были разжиженными или густыми, что было неудобно с точки зрения применения, а также отличались тем, что система подверглась расслоению и теряла свои структурно-механические свойства.
Состав на 1 см2 мембраны
Активных веществ:
Фибриноген
Тромбин
Вспомогательные вещества:
Коллаген
Гиалуроновая кислота
Натрия хлорид
Натрия цитрат
Рибофлавин
3.5-5.5 мг
1-2 МЕ
1.0-2.0 мг
0.5-1.0 мг
1.5 мг
0.4 мг
20.0 мкг
СП фирмы
СП фирмы
СП фирмы
СП фирмы
ГФ РК*
ГФ РК*
ГФ РК*
*-действующие издание
СП- спецификация фирмы производителя
Таким образом, создано биопокрытие на основе природных полимеров для лечения ожоговых и хирургических ран. Нами была проведена оценка качества полученных покрытий по показателям, предъявляемым нормативными документами. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Показатели качества мембраны Biotangish®FT
|
Показатели качества |
Соответствует пределам нормативных данных (ГФ РК I, т.1). |
Результаты |
|
Описание |
Тонкая губкообразная мембрана почти белого цвета с односторонним желтым покрытием. Имеет легкий запах уксуса и кислый привкус. Гигроскопичен. Размеры мембраны 4.0х4.0х0.5 |
Соответствует |
|
Идентификация: |
Коллагеновый слой испытуемого образца мембраны |
Соответствует |
|
- коллаген |
растворяется в растворе коллагеназы в течении 30 мин Испытуемый раствор, приготовленный для |
|
|
количественного определения имеет максимум |
||
|
- фибриноген |
поглощения при длине волны 546 нм Образование сгустка при добавлении фосфатного буферного раствора с рН 7.4 Образование светлой зеленовато-желтой окраски раствора и желтовато-зеленой флуоресценции при |
Соответствует |
|
- тромбин |
облучении ультрафиолетовым светом |
Соответствует |
|
- рибофлафин |
Соответствует |
|
|
Потеря в массе при высушивании |
Не более 15 ¿ |
8 % |
|
Стерильность |
Препарат должен быть стерильным |
соответствует |
|
Количественное |
||
|
определение: |
От 3.5 до 5.5 мг/см2 |
4.5 мг/см2 |
|
- фибриноген |
От 1.0 до 2.0 МЕ/см2 |
1.5 МЕ/см2 |
|
- тромбин |
Обсуждение и заключение. Таким образом, проведена фармацевтическая разработка биопокрытия на основе природных полимеров для лечения ожоговых и хирургических ран.
- разработаны состав и технология биопокрытии на основе фибриногена тромбина, коллагена и гиалуроновой кислоты для лечения ожоговых и хирургических ран;
- проведена оценка качества и определена стабильность разработанного препарата;
Научные исследования показали перспективность безотходной ресурсосберегающей технологии переработки сырья на основе природных полимеров для создания фармацевтического препарата. Данная технология представляет интерес с экологической точки зрения, так как безопасна, используемый вещество не относится к токсическим материалом и может использоваться в процессе технологии лекарственного сырья, с целью получения целевых продуктов для применения во многих отраслях промышленности.
Выводы. Теретически и экспериментально обоснована возможность использования фибриногена, тромбина, коллагена и гиалуроновой кислоты, полученного из отечественного сырья для разработки новых препаратов, предназначенных для лечения ожоговых и хирургических ран. Запасы ЛС и животного сырья для производства природных препаратов в Республике Казахстан достаточны, что соответствует требованиям действующей в настоящее время Государственной программы по импортозамещению препаратов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Шаповалов С.Г. Современные раневые покрытия в комбустиологии// ФАРМиндекс-Практик. 2005. - №. 8. - С. 38-46.
- Бунатян, Артем Гарриевич. Эффективность применения раневого покрытия "Тахокомб" при резекциях печени. Автореферат диссертации. 2003. - С. 107.
- Л.П.Истранов и др. «Местные гемостатические средства на основе коллагена» Фармация - 2007.- №7. с 29 - 32.
- Семкина О.А., Джавахян М.А., Левчук Т.А., Гагулашвили Л.И., Охотникова В.Ф. Вспомогательные вещества, используемые в технологии мягких лекарственных форм (мазей, гелей, линиментов, кремов). Химико-фармацевтический журнал - 2006, - Т.39, №9. - C. 45-48.